Metody studia imunitní odpovědi

Co odebíráme pokud skoumáme imunitu

Serum

Hodnocené faktory imunity

• Zastoupení buněk

• Jednotlivé typy buněk

• Funkční testy

• Tvorba produktů

• Změny v jaderném materiálu

Aglutinace

Reakce mezi protilátkou a antigenem=> aglutinát viditelný okem

Precipitace v gelu

Cestování antigenu a protilátky gelem (všude, takže se potkaji)=> reakce

Jakej je rozdíl mezi tubidimetriíí a nefeltomtriíí

Stejný pokus, měření něčeho jiiného

nefeltometrie=> intenzita rozptýleného světla

Tubidimetrie=> intenzita světla procházejícího vzorkem

Jak můžeme značit protilátky

Radioizotop, enzym, pevná fáze

Uplatnění tubidimetrie a nefeltometrie

Stanovení koncentrace imunitních proteinů

Kroky imunoblottingu

• elektroforéza

• Přenos proteinů z gelu el. Pole

• Imunodetekce

Na čem je založené FACS

Na změně směru laseru při opadu na bunku

Co dokáže FACS mšřit?

Velikost, pH, membránový potenciál, granularitum expresi povrchových molekul, obsah DNA, intracel. Molekuly

Uplatnění FACS

Fenotypizace buněk pri analýze=> měření specifických buněk (lymf, speratogeneze, trombocyty, viry, bakterie, paraziti)

Na co se testují lymfoctyty

Exprese markerů, proliferace, cytotox, sekrece cytokinů, tvorba protilátek

Využití funkčních lymfocytových testů

• diagnostika SCID

• Nádory

• Monitorování imunity

• Monitorování rozvoje štěpu

• Testobání nových léků

Testy fagocytárních funkcí co se testuje

• Stanovení exprese adhezivních molekul

• Chemotaxe

• Fagoctoza

• Baktericidní test

• Testy oxidačního vzplanutí

Který vzorek považujeme za pozitivní u analýzy fagocytozy

3/100 buněk v sobě mají část která byla fagocytovaná

Fagocytární aktivita

Procentuální podíl fagocytů s pohlcenými částicemi/bez

Fagocytární index

Průměrný počet částic fagocytovaný jednou bunkou

Chemický priiopp testů na ox vzplanutí

Krev+forbalové estery+ dihydrorhodamin=> rhodamin(využívá se radikálů)

Rhodamin je furescenční=> dá se měřit