🦠🔬 Mikrobiologia - Laby - Instrukcje 📝💀

Porzućcie nadzieję wszyscy, którzy tu wchodzicie...

🦠🍸 Dla fermentujących pałeczek jelitowych.

🦠🍼 Dla jakich bakterii przeznaczone jest podłoże z laktozą pod parafiną?

🍸🍼 Pozwala wykryć ważną dla diagnozy pałeczek jelitowych cechę fermentacji laktozy.

🍼🕯 Jaką cechę, i jakich bakterii pozwala wykryć podłoże z laktozą pod parafiną?

🚫🫧 Rozkład laktozy bada się w warunkach beztlenowych.

🧪🕯 Pozwalają na to probówki pokryte parafiną.

❓🧫 W jakich warunkach bada się rozkład laktozy, i co gwarantuje takie warunki?

(Podłoże z laktozą pod parafiną)

🚫🫧 Rozkład laktozy bada się w warunkach beztlenowych.

🍸⚙ Warunki te przyjmuje się dla uproszczenia, ze względu na fermentacyjny charakter metabolizmu pałeczek jelitowych.

❓🧫 W jakich warunkach bada się rozkład laktozy, i co zmusza do przyjęcia takich warunków?

(Podłoże z laktozą pod parafiną)

🚫🫧 Rozkład laktozy bada się w warunkach beztlenowych.

🫧🐟 Beztlenowe warunki pozwalają oddzielić od jelitowych pałeczek fermentujących tlenowe bakterie rokładające laktozę.

❓🧫 W jakich warunkach bada się rozkład laktozy, i co pozwala osiągnąć przyjęcie takich warunków?

(Podłoże z laktozą pod parafiną)

🧪💜 Purpurę bromokrezolową.

🌡🫟 Jest to wskaźnik pH.

🧪❓ Co, oprócz laktozy, zawiera podłoże z laktozą pod parafiną?

⚙❓ Czym jest ten czynnik?

🧪💜 Purpurę bromokrezolową.

🍸💛 Przy fermentacji laktozy zmienia ona zabarwienie na żółte.

🧪❓ Co, oprócz laktozy, zawiera podłoże z laktozą pod parafiną?

🔬❓ Co jego obecność daje w trakcie próby?

🦠➖ To stałe podłoże diagnostyczne dla pałeczek gramujemnych o małych wymaganiach odżywczych.

🦠✅ Szczególnie często jest używane w diagnostyce bakterii Enterobacteriaceae.

🦠❓ Dla jakich bakterii jest przeznaczone podłoże Kliglera?

🦠🔍 Jakie bakterie często bada się na tym podłożu?

🦠➖ To stałe podłoże diagnostyczne dla pałeczek gramujemnych o małych wymaganiach odżywczych.

🔬✅ Pozwala ono badać:

• 🍬 zdolność rozkładu glukozy;

• 🍼 zdolność rozkładu laktozy;

• 🐟 zdolność wytwarzania siarkowodoru.

🦠❓ Dla jakich bakterii jest przeznaczone podłoże Kliglera?

🔬⚙ Jakie cechy pozwala ono badać? [3]

🧪📐 Przygotowywane jest w probówkach w postaci małych półskosów.

🔍🌡 Podłoże wymaga starannego posiewu części słupkowej (wkłucie).

• ^➕_➖ Ma mało inokulum i dużo podłoża.

🔍📐 Podłoże wymaga starannego posiewu w części skośnej.

• _➖^➕ Ma dużo inokulum i mało podłoża.

🔧❓ W jaki sposób jest przygotowywane podłoże Kliglera?

💢❔ W jakie kształty jest układane, i jaki jest ich skład?

📊🔍 Skład:

• 🍬 glukoza;

  • proporcja 1:10 z laktozą;

• 🍼 laktoza;

  • proporcja 10:1 z glukozą;

• 🐟 tiosiarczan;

• 🤖 jony żelaza;

  • wskaźnik wytwarzania H₂S;

• 🫟 wskaźnik pH.

🎨🩷 Podłoże ma łososiową barwę.

📊🧫 Jaki jest skład podłoża Kliglera?

🎨❓ Jaką ma ono barwę?

⚙🍬 Rozkład glukozy powoduje zakwaszenie i zmianę zabarwienia na żółtą.

⏩️🌡 Zmiana szybciej pojawia się w części skośnej, wolniej w części słupkowej.

💛🩷 Rozkład aminokwasów powoduje wtórną alkalizację i powrót łososiowej barwy.

• (skos łososiowy + słupek żółty = rozkład glukozy);

🔬🍬 Jakie są dokładne obserwacje przy badaniu cechy rozkładu glukozy?

(Podłoże Kliglera)

⚙🍼 Rozkład glukozy i laktozy powoduje zakwaszenie i zmianę zabarwienia na żółtą.

🕰💛 Zmiana pojawia się w części skośnej i słupkowej, i utrzymuje się wiele godzin.

• (skos żółty + słupek żółty = rozkład laktozy)

🔬🍼 Jakie są dokładne obserwacje przy badaniu cechy rozkładu glukozy i laktozy?

(Podłoże Kliglera)

🩷❤ Brak rozkładu cukrów objawia się pogłębieniem pierwotnej barwy podłoża.

• Kolor łososiowy zmienia się w czerwony.

🍬✅ Jakie są dokładne obserwacje przy braku rozkładu cukrów?

(Podłoże Kliglera)

🍬🍸 Rozkład cukrów ma charakter fermentacji.

⚙🫧 W trakcie procesu powstają duże ilości gazów:

• 😮‍💨 CO₂;

• 💦 H₂.

🔝⛓‍💥 Powstawanie gazów powoduje unoszenie lub rozrywanie podłoża.

⚙❓ Jaki charakter ma rozkład cukrów?

🔍❓ Co powstaje w trakcie tego procesu?

🔍🧫 Jak wpływa to na podłoże?

(Podłoże Kliglera)

🐟☠ Tiosiarczan w kwaśnym środowisku powoduje powstawanie H₂S.

🤖🖤 Powstający H₂S reaguje z jonami żelaza tworząc nierozpuszczalny, czarny siarczek żelaza.

• 🕰 Ocena podłoża powinna nastąpić po 24h.

🐟❓ Jaka jest rola tiosiarczanu w podłożu Kliglera?

🔍❓ Na jaką obserwację wpływa, i jakie są jej wymagania?

📏⚗ Podłoże wchodzi w skład podstawowego (izolacyjnego) szeregu biochemicznego dla fermentujących pałeczek jelitowych.

➕🔩 Jakie jest dodatkowe zastosowanie podłoża Kliglera?

To metaboliczny enzym, który rozkłada toksyczny nadtlenek wodoru (H2O2).

Wytwarza go większość bakterii beztlenowych.

Czym jest katalaza?

Jakie bakterie ją wytwarzają?

Badanie obecności katalazy pozwala na różnicowanie ziarenkowców i pałeczek gramdodatnich.

Co pozwala wykryć badanie obecności katalazy?

Przebieg próby:

• bakterie hodowane na pożywce stałej;

• zawieszenie bakterii w kropli 3% H₂O₂.

Jakie są wymagane składniki i warunki dla zbadania obecności katalazy?

Uwalnianie pęcherzyków tlenu.

Jaka jest oczekiwana obserwacja świadcząca o dodatnim wyniku próby na obecność katalazy?

H₂O₂ może wchodzić w niespecyficzną reakcję ze składnikami podłoża.

Dlaczego próby na obecność katalazy nie przeprowadza się poprzez dodanie H₂O₂ do hodowli bakterii.

Hodowle bakterii na podłożach zawierających krew.

(Obecne w krwi erytrocyty naturalnie zawierają katalazę)

Jakie hodowle bakterii nie mogą być badane na obecność enzymu katalazy?

(punkty dobrego studenta za odpowiedź: dlaczego?)

U bakterii:

• tlenowych;

• względnie beztlenowych;

• mikroaerofilnych.

U jakich bakterii występują cytochromy?

(Wykrywanie oksydazy cytochromowej)

1. Dodanie 1% wodnego roztworu dimetylo-p-fenylodiaminy/tetrametylo-p-fenylodiaminy na bakterie na kolonii;

2. Roztarcie masy bakteryjnej (podłoże agarowe; masa zebrana szklaną/plastikową bagietką) na bibule i dodanie 1% wodnego roztworu dimetylo-p-fenylodiaminy/tetrametylo-p-fenylodiaminy.

Opisz dwie metody wykrywania oksydazy cytochromowej.

Dodanie 1% wodnego roztworu dimetylo-p-fenylodiaminy/tetrametylo-p-fenylodiaminy na bakterie na kolonii.

Opisz metodę wykrywania oksydazy cytochromowej bezpośrednio na kolonii bakteryjnej na płytce.

Roztarcie masy bakteryjnej (podłoże agarowe; masa zebrana szklaną/plastikową bagietką) na bibule i dodanie 1% wodnego roztworu dimetylo-p-fenylodiaminy/tetrametylo-p-fenylodiaminy.

Opisz metodę wykrywania oksydazy cytochromowej poza kolonią bakteryjną.

Pojawienie się granatowego zabarwienia w ciągu minuty.

Błękit indolofenolowy

Jaka jest oczekiwana obserwacja dla dodatniej próby na obecność oksydazy cytochromowej?

Jak nazywa się czynnik powodujący obserwacje?

Produkty:

• indol;

• skatol;

• kwas pirogronowy;

• NH₃.

Opisz w jakie dokładnie produkty przekształcany jest tryptofan przez tryptofanazę.

Podłoże składa się z wody peptonowej z dodatkiem tryptofanu.

37^oC przez 24h.

Z czego składa się podłoże, na które posiewa się bakterie?

Jakie są warunki inkubacji?

(Rozkład tryptofanu do indolu)

Metoda Kovacsa.

Zmodyfikowany odczynnik Ehrlicha:

• p-dimetyloaminobenzaldehyd

• alkohol amylowy;

• HCl_(stęż.).

Jak nazywa się metoda wykrywania indolu?

Jak nazywa się, i z czego składa się odczynnik wykorzystywany do wykrywania indolu?

(Rozkład tryptofanu do indolu)

Pojawia się ciemnoróżowe zabarwienie.

Jaka obserwacja świadczy o pozytywnym wyniku próby?


(Rozkład tryptofanu do indolu)

Podłoża:

• ubogie, płynne podłoże Stuarta

• płynne, bogatsze podłoże Christensena.

Podłoża te zawierają:

• mocznik (2%);

• wskaźnik pH (czerwień fenolową).

Jakie są najpopularniejsze podłoża używane przy badaniu rozkładu mocznika?

Co zawierają te podłoża?

Produkty reakcji:

• NH3;

• CO2.

Jakie są produkty reakcji enzymatycznego rozkładu mocznika przez bakterie?

Jakie są obserwacje i co je powoduje?