mikrobiologia laby

rodzaje agaru

• stały

• płynny

• półpłynny

składniki podłoża agarowego

• 5.6g podłoża agarowego

• 200 ml wody dejonizowanej

czemu nie używamy zwykłej wody

• może zmieniać pH

• zawiera jony

etapy przygotowania agaru

• wymieszać agar z woda

• podgrzać - powoli, doprowadzić do wrzenia, agar staje się klarowny

• sterylizacja - temp 126; czas sterylizacji 15 min

• rozlać agar do płytek - 2-3 mm

• oznaczyć AO

• po wystygnięciu włożyć do lodówki

kontrola sterylizacji - wskaźniki chemiczne

• klasa I - po sterylizacji zmienia kolor na czarny

• klasa IV - wskaźnik emulacyjny - zmienia kolor z żółtego na czarny, reaguje po całkowitej sterylizacji, kontroluje wszystkie parametry krytyczne

posiew i inkubacja e.coli

• niekierunkowy - po posianiu redukujemy próbkę do izolacji pojedynczego klonu

• płytki umieszczamy w 37C

przygotowanie zawiesiny i rozcieńczeń

• zawiesiny od 10-1 do 10-3

• do każdej probówki dodajemy 9 ml soli fizjologicznej i 1 ml zawiesiny z kolejnego rozcieńczenia

czym jest JTK/ml

jednostki tworzące kolonie na ml

liczba żywych drobnoustrojów zdolnych do wzrostu w 1 ml próbki

co oznacza sanepid

• ogólna liczbę bakterii

• ogólna liczbę grzybów

• występowanie bakterii chorobotwórczych

czynniki środowiskowe

• temperatura

• struktura

• światło

• materiał

• częstość dotykania

higiena rak

• mycie rak - 90 sekund

• 15s nawilżenie

• 60s - mycie właściwe

• 15s - spłukiwanie

• dezynfekcja rak - 60 s

jaki jest cel posiewu mikrobiologicznego

wyizolowanie pojedynczych kolonii drobnoustrojów; uzyskanie czystej kultury jednego gatunku

jaki jest cel rozcieńczania

policzenie liczby drobnoustrojów w próbce gdy jest ich za dużo

jak przeliczamy liczbę JTK przy rozcieńczeniu

• dzielimy płytkę na 4 równe części

• liczby liczbę komórek na ¼ płytki

• liczbę mnożymy x4

• mnożymy x 10000 - jako 4 krotne rozcieńczenie

• zmieniamy na ml czyli x10

• wynik

czynniki środowiskowe wpływające na rozwój bakterii

• temperatura

• tlen

• pH

• aktywność wody - cukier i sól zmniejszają aktywność wody; optymalna aktywność wody dla większości bakterii: 0,96-0,99

• ciśnienie osmotyczne

• dwutlenek węgla

• dostępność do substancji odżywczych

gdzie występuje salmonella

• surowe mięso - mielone

• produkty jajeczne - majonez, lody, kremy

• wyroby garmażeryjne

• nabiał - masło, śmietana, mleko w proszku, owoce i warzywa

gdzie występuje listeria monocytogenes

• żywność gotowa do spożycia

• surowe mięso

• białe sery

gdzie występuje clostridium botulium

• domowe konserwy roślinne ph >4,5 np. groszek i marchew

• żywność próżniowa

• wędzone ryby i kiełbasy

gdzie znajdziemy campylobacter

surowe mięso

staphylococcus aureus - gronkowiec złocisty

• wędliny

• produkty mięsne

• sałatki

• ciastka

• lody

• jego enterotoksyny mogą występować w serach i mleku w proszku

gdzie występuje escherichia coli

• surowe i krwiste mięso

• niepasteryzowane mleko

• woda z kranu

• owoce morza

gdzie występuje yersinia

• mięsie

• mleku

• wodzie

• niektórych warzywach

• jadalne skorupiaki

co najcześciej znajduje się w mleku i nabiale

• streptococcus lactis - inicjuje kwaszenie i obniża pH

• lactobacillus - dominuje w kwaśnym środowisku

jakie bakterie znajdziemy w zbożach

• pseudomonas

• micrococcus

• lactobacillus

• przetrwalnikujące bacillus

co znajdziemy w cukrze

• leuconostoc

• bacillus

co znajdziemy w przyprawach

• e.coli

• enterokoki

• staphylococcus aureus

• salmonella

co znajdziemy w jajach

• salmonella enteritidis

• campylobacter

• proteus

co znajdziemy w glebie

• bacillus

• proteus

co znajdziemy w dzikiej wodzie

• pseudomonas fluorescens

• vibrio

• aeromonas

co znajdziemy w wodzie pitnej

• e.coli

• clostridium

• legionella

co stanowi ogólne zanieczyszczenie

• clostridium - kurz i ziemia

MacConkey - podłoże

• do wykrawania gram ujemnych - bezbarwne

• fiolet krystaliczny i sole żółciowe hamują wzrost gram dodatnich

• fermentuje laktozę - to wtedy wyskakują kolonie różowe - wskazuje to na e.coli

ECC

• escherchia coli chromagar

• e.coli na niebiesko - fioletowo

• mogą wyskoczyć inne bakterie coli - barwią się na różowo, czerwono i bezbarwnie

• skład podłoża nieznany

SS - podłoże

• Salmonella - Shigella Agar

• czarne oleiste - salmonella

• bezbarwne - shigella

• wykrawanie H2S - on powoduje czarny kolor

• sole i fiolet - hamuje wzrost bakterii gram dodatnich

• E.coli - różowe zabarwienie

MSA - podłoże

Manntiol Salt Agar

• gronkowiec - nieantybiotyko oporny - na żółto

• bardzo wysokie stężenia soli - hamuje wzrost większości bakterii poza gronkowcami

• zachodzi fermentacja mannitolu i jest żółte zabarwienie podłoża

agar odżywczy

nie ma substancji hamujących

bogate podłoże

SAB

• do hodowli grzybów

• niskie pH 5,6

• wysoka zawartość glukozy

• hamuje wzrost większości bakterii przez co wychodzą grzyby

• chloramfenikol - antybiotyk - hamuje wzrost bakterii

• cykloheksan do hamowania grzybów saprofitycznych

jakie podłoża wyróżniamy

• ogólne

• selektowyno- różnicujących

substancje aktywne w przyprawach

• czosnek - Alina podczas rozdrabniania zamienia się w alicyne

• pieprz - piperyna

• papryka - kapsaicyna

• cząber - tymol, karwakrol

• cynamon - aldehyd cynamonowy

• ziele - eugenol

• goździk - eugenol ale większą zawartość

• majeranek - terpinen

LPS

• lipopolisacharyd

• jest endotoksyną

• znajdziemy go w budowie ściany gram ujemnych

• ochrona przed biocydami i antybiotykoopornosc przez co może generować gorączkę

budowa gram ujemnych

• wewnątrz - dwu warstwa lipidowa

• przestrzeń periplazmatyczna - mureina

• zewnętrzna - LPS

etapy barwienia bakterii

• czyścimy szkiełko etanolem

• dajemy bakterie z ezy

• ogrzewamy nad palnikiem

• fiolet krystaliczny który działa przez ściany komórkowe i bakterie gram dodatnie i ujemne

• dodajemy płyn Lugola by utrwalić fiolet krystaliczny, tworzy on kompleks który jest za duży żeby wyjść przez ścianę bakterii gram +, dlatego po odbarwieniu gram dodatniej zostają fioletowe

• dodajemy safranine lub fuksyne i barwimy gram ujemne

• następnie przemywamy alkoholem i ogrzewamy pod palnikiem