Immunologia IV

Apoptoza

programowana śmierć komórki, charakteryzuje się aktywacją specyficznych szlaków biochemicznych, wyróżnia się fazę inicjacji i egzekucji. Jeden z najistotniejszych szlaków przemian biochemicznych obejmuje aktywację kaskad kaspaz. Kaskada ta jest uruchamiana w wypadku cytotoksyczności.

Apoptoza a nekroza:

APOPTOZA:

• proces aktywny (wymaga uruchomienia szlaków metabolicznych),

• komórki apoptotyczne kurczą się, błona ulega wypukleniu, tworzą się ciałka apoptotyczne, które ulegają fagocytozie,

• proces fizjologiczny,

• dotyczy zazwyczaj pojedynczych komórek

NEKROZA:

• proces pasywny,

• komórki martwicze ulegają obrzękowi, rozrywa się błona komórkowa, a cytoplazma wylewa się do środowiska, składniki komórki trawione są przez hydrolazy lizosomalne,

• proces patologiczny,

• dotyczy zazwyczaj całych skupisk komórek, zachodzi masowo

Barwnik Annexin V (aneksyna V)

> wykrywa zewnętrzną fosfatydyloserynę w celu identyfikacji komórek apoptotycznych!

stosowany do wykrywania komórek apoptotycznych. Aneksyna V jest białkiem wiążącym fosfatydyloserynę, której reszty podczas początkowych faz apoptozy przemieszczają się z wewnętrznego do zewnętrznego listka błony plazmatycznej.

Barwnik PI (jodek propidyny)

barwnik, który wnika przez uszkodzone błony komórek nieżywotnych - barwiąc je na czerwono. Używany jest do określenia liczby komórek oraz stanu ich żywotności

Barwnik Hoechst

>to barwnik do barwienia DNA, który wykazuje niską cytotoksyczność. Fluoryzuje na niebiesko i jest używany jako wskaźnik całkowitej liczby komórek!

barwnik ten przenika przez nienaruszone błony biologiczne, wybarwia DNA, powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych, chromosomów, mitochondriów

Barwnik DAPI

barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA, powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych i chromosomów. Zaburza strukturę DNA, jest toksyczny i mutagenny, przez co barwienie komórek tym barwnikiem je zabija

Test LDH

test ten określa uszkodzenie tkanek, ponieważ mierzy poziom LDH we krwi. LDH to enzym występujący w tkankach całego organizmu, a podczas usuwania starszych komórek LDH z nich dostaje się do krwi. Wyższy poziom stężenia LDH we krwi oznacza zatem zwiększoną ilość obumierających komórek

Test MTT

test określający żywotność komórki. Oparty na zdolności enzymu - dehydrogenazy mitochondrialnej do przekształcania pomarańczowej soli tetrazoliowej (MTT/XTT/WST) do ciemnoniebieskiego formazanu.

>im więcej formazanu jest wytworzone, tym więcej żywych komórek