Metody studia proteinů 2

Stanovení aminokyselinové sekvence proteinů možnosti

Edamovo odbourávání, hmotností spektrofotometrie

Edamovo odbourávání

Označení, odštěpení N konce

Hmotnostní spektrofotometrie

Rozděluje vzorky podle poměru hmotnost/elektrický náboj

Stanovení lokalizace proteinu v buňce

Mikroskopické techniky

• detekce pomocí protilátek

• Fluorescenční vs konfokální mikroskopie

• Detekce pomocí GFP

Frakcionace buněk

Detekce pomocí protilátek

Fluorofor + protilátky (vazba)

Přímá imunodetekce

Fluorofor+ primární protilátka

Nepřímá imunodetekce

Fluorofor je napojen až na sekundární protilátku => amplifikace signálu

Fluorofor

Molekula schopná absorbovat světlo a vyzařovat světlo jiné vln. Délky

Jaký je rozdíl mezi konfokálním a fluoescenčním mikroskopem?

Konfokální opravuje nedostatek fulorescenčního, je schopen detekovat jednotlivé vlny

Jak dostávámé GFP do proteinu

Skrze vir

Riziko GFP

Mohou se vytvořit artefakty

Co snímá SDS westernblot

Délku proteinu

Součásti 2D elektroforézy

Isometrická fokusace (podle náboje), SDS page

Na co se používá ELISA

Detekceprotilátek, virových infekcí(hepB,C,HIV), protizánětlivé markery v krvy, hormony(HCG,LH,TSH,T3,T4)

Co určuje průtoková cytometrie

Expresi povrchových molekul, možnost je třídit podle kvalit

Po porušení memb. I intracel

Stanovení role proteinů možnosti

Genový knock down a siRNA,genový knockout, over-exprese proteinu

Genový knock down

Snížení exprese proteinu (využití obrany proti dsRNA)

Genový knock out

Obě alely genu odstraněny, žádná expresivita

Overexprese proteinu

Sleduje efekt nadbytku proteinu