kraujo grupiu sistemos. kraujo ir audiniu suderinamumo principai

Kas yra imunohepatologija?

mokslas apie kraujo antigenus ir antikūnus, jų sandarą bei sąveiką.

Kas yra audiniu suderinamumas?

• tai savybė turėti tuos pačius arba pakankamai panašius alelius ir genųrinkinius, vadinamus žmogaus leukocitų antigenais (HLA) arba pagrindiniu audinių suderinamumo kompleksu (MHC)

• abipusės tolerancijos būsena, leidžianti vieno organizmo audinius efektyviai persodinti į kitą organizmą.

Kas yra antigenas?

svetima organizmui medžiaga, kuri gali sukelti imuninį atsaką (inicijuoja antikūnų sintezę)

Kas yra antikunas?

baltymas, kuris specifiškai reaguoja su antigenu, sukėlusiu jo gamybą.

Kas yra agliutinacija?

yra korpuskulinių antigenų sujungimas su antikūnais.

Korpuskulinės dalelės gali būti latekso dalelės arba eritrocitai (hemagliutinacijos reakcija)

Kas yra hemagliutinacija?

eritrocitų sulipimas, kuris yra sąlygojamas eritrocitų sąveikos su antikūnais prieš eritrocitų antigenus.

Kas yra donoras ir recipientas?

• Donoras – tai asmuo, dovanojantis savo ląsteles, audinius ar organus kitam žmogui.

• Recipientas (gavėjas) – asmuo, kuris gauna ląsteles, audinius ar organus.

Kas yra transplantacija?

Audinių, ląstelių ir (ar) organų paėmimas ir persodinimas į kito žmogaus kūną gydymo tikslu

Kas gali buti po transplantacijos?

• Į(si)jautrinimas, sensibilizacija (angl. Sensitisation)

• Recipientai į(si)jautrina, jei jų imuninė sistema sutinka svetimus (pvz. HLA) antigenus ir, reaguodama į juos, gamina antikūnus prieš juos.

• Į(si)jautrinimas dažniausiai atsiranda dėl nėštumo, kraujo perpylimo ar ankstesnės transplantacijos. Į(si)jautrinimas HLA sistemos antigenams vertinamas reaktyviu antikūnu paneliu (PRA). Labai įsijautrinusiems pacientams sudėtingiau parinkti tinkamą donorą, jie labiau linkę atmesti organą nei pacientai, kurie nėra įsijautrinę.

Kokie yra kraujo antigenai?

• Eritrocitų antigenai

• Leukocitų antigenai

• Trombocitų antigenai

• Plazmos baltymai (antigenai)

Kokios yra imunoglogulinu (antikunu) klases, pagal fizikines, chemines ir biologines savybes?

• IgG

• IgM

• IgE

• IgA

• IgD

IgM ir IgG skirtumai ir savybes

Kas yra pirminiai atsako antikunai?

IgM, nes Po pirminės sensibilizacijos kraujo grupių antigenais, pirmiausiai pradeda gamintis IgM klasės antikūnai

Kaip nustatant kraujo grupes yra panaudojami IgM klases antikunu standartiniai serumai?

Molekulė turi 10 aktyvių jungimosi sričių, todėl lengvai ir stipriai jungiasi su eritrocitų antigenais, sukelia ryškią agliutinaciją. Ši savybė panaudojama kai nustatant kraujo grupes naudojami IgM klasės antikūnų standartiniai serumai

Kada gaminasi IgG?

dėl buvusio nėštumo, gimdymo, kraujo perpylimo, transplantacijos

Kokia yra IgG funkcija?

• Gali aktyvinti komplementą.

• Susidarius IgG klasės antikūnams susidaro ir imuninė atmintis – t.y. po pakartotinio kantakto su tuo pačius antigenu gali būti žymiai audringesnė organizmo reakcija

Kaip skirstomi antikunai pagal susidarymo mechanizma?

• Natūralūs arba įgimti – plazmoje esantys įprasti organizmui antikūnai susidarantys ne prieš svetimus antigenus, bet susiformavę evoliuciškai. Pvz. O kraujo grupės žmonių kraujyje yra antikūnai prieš A antigeną (anti-A) ir antikūnai prieš B antigeną (anti-B).

• Imuniniai (įgyti) – antikūnai susidarę organizme kaip atsakas į eritrocitų antigenus perpilant kraują ar eritrocitų antigenams patekus į motinos kraują nėštumo ar gimdymo metu. Pvz. antikūnai prieš RhD (anti-D). Gali būti IgM ir IgG klasės

Kaip skirstomi antikunai pagal antigenus, kurie sukele ju gamyba?

• Aloantikūnai – susidaro kai organizmą veikia jam svetimi tos pačios rūšies kraujo grupių antigenai. Pvz.mperpilus netapataus pagal RhD kraujo.

• Autoantikūnai – tai antikūnai susidarantys prieš savo eritrocitų antigenus

Kaip skirstomi antikunai pagal veikimo temperatura?

• Šilumos antikūnai aktyvūs t.y. reaguoja su antigenais 37°C temperatūroje.

• Šalčio antikūnai aktyvūs kambario ir žemesnėje temperatūroje

Kaip skirstomi antikunai pagal antigenu ir antikunu saveikos nustatymo buda?

• agliutinuojantys (agliutininai),

• neagliutinuojantys (nepilni atikūnai, jiems nustatyti reikalingas antiglobulinas),

• aktyvinantys komplementą.

Eritrocitu pavirsiaus antigenu darinys vadinama….

Kraujo grupe

Kaip identifikuojami antigenai, priklausantys kraujo grupiu sistemai?

pagal 6 skaitmenų skaičių. Pirmieji 3 skaitmenys reiškia sistemą (pvz., 002 MNS), antrieji 3 antigeną (pvz., 002003 S).

kaip klasifikuojami eritrocitų antigenai, kurie ne visada sudaro pilnavertes kraujo grupių sistemas, bet yra svarbūs transfuzinėje medicinoje?

• Antigenų kolekcijos/rinkiniai (serija 200) skirtos grupuoti antigenus, kurie yra biochemiškai, genetiškai ar serologiškai panašūs, tačiau neatitinka kraujo grupės kriterijų.

• Reti eritrocitų antigenai, kurių dažnis < nei 1% (serija 700)

• Dažni eritrocitų antigenai, kurių dažnis > nei 90%

Kliniškai reikšmingi antikūnai sukelia:

– Transfuzines reakcijas;

– Vaisiaus ir naujagimio hemolizinę ligą (NHL; angl. Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN)).

Kas yra transfuzines reakcijos?

tai nepageidaujami reiškiniai, susiję su viso kraujo arba vieno iš jo komponentų perpylimu

I ka skirstomos transfuzines reakcijos?

• imunines

• Neimunines

Kokios yra transfuzines ligos?

Kas yra naujagimiu hemolizine liga?

tai būklė, kai vaisiaus arba naujagimio eritrocitus ardo motinos antikūnai, susidarę prieš vaisiaus ar naujagimio antigenus dėl skirtingų motinos ir jos vaisiaus eritrocitų antigenų.

• Antikūnai gali būti susidarę:

– praėjusio nėštumo metu,

– dėl buvusio kraujo perpylimo.

Kokia yra svarbiausia kraujo grupiu sistema?

ABO

Kokios yra skiriamos keturios ABO kraujo grupes?

A, B, O ir AB.

ABO kraujo grupių antigenai ir antikūnai

Kaip paveldimos ABO kraujo grupes

• paveldimi pagal Mendelio dėsnį dominuojančiu būdu.

• Tiek A, tiek B aleliai yra dominantiniai

• O genas yra recesyvinis tylus genas, nes jis neturi geno produkto arba gamina neaptinkamą produktą.

• Paveldėjimas priklauso nuo to ar tėvai yra homozigotai ar heterozigotai.

Pagal kokia reakcija nustatoma ABO grupe?

hemagliutinacijos reakcijos pagalba dviem būdais:

– tiesioginiu būdu (nustatomi antigenai)

– atvirkštiniu būdu (nustatomi antikūnai)

Tiesioginio ir atvirkstinio kraujo grupiu nustatymo skirtumai?

Kokia yra antra pagal svarba kraujo grupiu sistema?

Rh - rezus

Kam svarbi Rezus (Rh) kraujo grupe?

• Svarbi kraujo perpylimui

• gerai žinoma kaip pagrindinė vaisiaus ir naujagimio hemolizinės ligos (NHL) priežastis

Koks yra pagr antigenas Rh sistemoje?

D

Terminas Rh teigiamas ir Rh neigiamas reiškia…..

D antigeno buvimą arba nebuvimą.

Rh teigiamas = RhD teigiamas

Rh neigiamas = RhD neigiamas

Kokie yra kiti dazniausi Rh sistemos antigenai?

C ir c bei E ir e antigenai.

• Įprastai šių antigenų tipai nustatomi tik tada, kai atsiranda antikūnų prieš juos, dažniausiai dėl ilgalaikių kraujo perpylimų

Kokie yra RhD antigeno variantai (D fenotipai)?

• normalus RhD

• Silpnas RhD

• Dalinis RhD

RhD antigeno variantu skirtumai

Silpno RhD ir dalinio RhD klinikinė reikšmė:

Silpnas RhD:

• Donoras RhD teigiamas

• Recipientas RhD teigiamas

Dalinis RhD:

• Recipientas RhD neigiamas

• Donoras RhD teigiamas

• Kai įprastais serologiniais metodais negalima

nustatyti tam tikro D varianto reikia nustatyti

RhD genotipą.

Kokios yra kitos svarbios kraujo grupiu sistemos?

• Kell ISTH 006

• MNS ISTH 002

• Lutheran ISTH 005

Kraujo grupiu klinikine reiksme

• Kraujo grupių antigenai ir antikūnai yra svarbūs atliekant kraujo perpylimus, vaisiaus naujagimio hemolizinės ligos išsivystymui (NHL) ir kai kurioms organų transplantacijos.

• Antigenų struktūros, funkcijos ir genetinės kilmės supratimas yra svarbus transfuzinei medicinai, transplantacijoms ir kai kurių ligų tyrimams

Kraujo perpylimas arba …..

Transfuzija- donoro kraujas pacientui suleidžiamas į veną.

Kokia yra kraujo perpylimo reiksme?

• Ši potencialiai gyvybę gelbstinti procedūra gali padėti pakeisti kraują, prarastą dėl operacijos ar traumos.

• Kraujo perpylimas taip pat gali padėti, jei dėl ligos paciento organizmas negali tinkamai gaminti kraujo ar kai kurių jo komponentų

Koks atliekamas tyrimas pries kraujo perpylima?

Kraujo suderinamumo tyrimas

Kam naudojamas kraujo suderinamumo tyrimas?

• patvirtina kraujo komponento ir recipiento ABO ir RhD suderinamumą

• nustato ar recipientas turi kliniškai reikšmingų antikūnų prieš kraujo grupių antigenus

Kaip vyksta kraujo suderinamumo tyrimas (dalys)?

• Tinkamas ėminių paėmimas

• Paciento (recipiento) perpylimo istorijos (anamnezės) peržiūra

• ABO kraujo grupės ir Rh D nustatymas

• Antikūnų prieš eritrocitų antigenus tyrimas (atrankinis/antikūnų identifikavimas)

• Donoro ir recipiento kraujo suderinamumo tyrimas

• Perpylimo procedūra

Kraujo suderinamumo tyrimo etapai:

• Ikianalizės

• Analizės

• Poanalizės

Kas vyksta kraujo suderinamumo tyrimo ikianalizes etape?

• Paciento ir ėminio identifikavimas

• Ėminių paėmimas

• Paciento kraujo perpylimo istorijos (anamnezės) peržiūra

Kaip vyksta eminio paemimas kraujo suderinamumo tyrimui?

• Ėminiai imami į mėgintuvėlį su K2EDTA arba K3EDTA.

• Jei ėminys hemolizuotas, jis gali būti atmestas kaip netinkamas.

• Hemolizė pacientams sukelia komplemento aktyvaciją.

• Ėminiai turi būti ženklinami prie paciento (iš anksto ženklinti nerekomenduojama).

• Turi būti įrašai apie asmenis, kurie ima (arba tiria) ėminius, kad klaidos atveju būtų galima atsekti eigą.

• Mėginiai turėtų būti ištirti ne vėliau kaip per 72 val. nuo, paėmimo, kitaip gali nebelikti nuo komplemento priklausomų antikūnų.

Kas tikrinama paciento kraujo perpylimu istorijoje (anamneze) ?

• Patikrinkite paciento įrašus, ar nėra buvę antikūnų prieš eritrocitų antigenus.

• Patikrinkite, ar yra buvę ankstesnių kraujo perpylimų ir potransfuzijos reakcijų.

Koks atliekamas kraujo suderinamumo tyrimas?

Serologinis tyrimas

Kokios yra Serologinio tyrimo 3 grupes (kokia tyrimu seka prieš transplantaciją)?

• ABO kraujo grupės ir Rh D nustatymas kraujyje tiesioginiu ir atvirkštiniu būdu tyrimai atliekami PIRMIAUSIA. Ėminiai šiems tyrimams yra:

– paciento kraujas,

– kraujo produktai / komponentai.

• Antikūnų atrankinis tyrimas / antikūnų identifikavimas. Ėminys šiam tyrimui – paciento kraujas, mėginiai (ta kraujo dalis, kuri naudojama tyrimui atlikti) – plazma / serumas.

• Donoro ir recipiento kraujo suderinamumo tyrimas. Mėginiai: paciento plazma/serumas ir kraujo produktų/komponentų eritrocitai. Šis tyrimas:

– dvigubas ABO patikrinimas;

– kitas būdas nustatyti antikūnų buvimą;

– padeda išvengti potransfuzinių reakcijų.

Kaip parenkami kraujo produktai suderinamumo tyrimui?

• Jei paciento plazmoje/serume antikūnų nebuvo nustatyta, suderinamumo tyrimas yra atliekamas su tos pačios ABO kraujo grupės ir RhD kraujo produktu. Atliekamas suderinamumo tyrimas naudojant paciento plazmą/serumą ir RBC (iš kraujo produkto/komponento vieneto).

• Jei paciento plazmoje/serume aptinkami antikūnai, suderinamumo tyrimui parenkamas kraujo komponentas tos pačios ABO ir RhD kraujo grupės ir kuriame nėra Ag prieš kuriuos rasti antikūnai paciento plazmoje/serume. Suderinamumo tyrimas atliekamas naudojant paciento plazmą/serumą ir RBC (iš kraujo produkto/komponento vieneto).

Kraujo suderinamumo tyrimo privalumai

• Patikrinti donoro RBC ABO ir RhD suderinamumą

• Aptikti daugumą antikūnų prieš donoro RBC antigenus.

Krajo suderinamumo tyrimo trukumai

• Garantuoti normalaus perpiltų donorų eritrocitų išgyvenimo,

• Užtikrinti, kad pacientui nesusidarys antikūnai,

• Aptikti visus antikūnus prieš donoro RBC,

• išvengti uždelstų perpylimo (potransfuzinių) reakcijų,

• Nustatyti ABO ir RhD tyrimo klaidas.

Kokie dazniausiai persodinami organai ir audiniai?

• inkstai, širdis, kepenys, plaučiai, žarnos ir kasa.

• Taip pat gali būti persodinami audiniai, įskaitant širdies vožtuvus, kaulus, sausgysles, raiščius, odą, akies ir kt. audinius.

Kokios yra transplantacijos rusys ir ju apibudinimai?

• Autotransplantacija – to paties individo (pvz. odos, kraujodaros kamieninių ląstelių) transplantacija iš vienos vietos į kitą.

• Alogeninė transplantacija – tarp dviejų genetiškai skirtingų individų.

• Singeninė transplantacija – tarp monozigotinių dvynių.

• Ksenotransplantacija – tarp skirtingų rūšių.

Nuo kokiu faktoriu priklauso organu transplantacija?

• imunoliginiai

• Neimunologiniai

Kas yra MHC (didysis audiniu suderinamumo kompleksas)?

unikalus žymenų rinkinys. Siekiant MHC specifiškiau susieti su žmogaus organizmu, ji pavadinta žmogaus leukocitų antigenų (ŽLA, angl. Human Leukocyte Antigen, HLA) sistema.

Nuo ko priklauso audiniu ir organu transplantacijos sekme?

Nuo donoro ir recipiento ŽLA (ne)sutapimo

Kokia yra HLA savybe?

HLA yra polimorfiški allo-antigenai, o tai reiškia, kad tas pats geno lokusas (vieta) skirtinguose tos pačios rūšies individuose koduoja skirtingus antigenus (baltymus). Todėl kai vieno individo antigenas yra pernešamas kitam, neturinčiam šio antigeno, prasideda imuninis atsakas prieš perneštą svetimą antigeną

Kokia yra MHC funkcija?

Antigeno atpazinimas - pateikti antigenus kaip svetimų baltymų fragmentus, formuojant kompleksus, kuriuos gali atpažinti T limfocitai

MHC stoka = imuninio atsako stoka

Kur yra lokalizuoti žmogaus leukocitu antigenu (ŽLA) kompleksa koduojantys genai?

6 chromosomos trumpajame petyje

Kokios yra skiriamos ZLA klases?

I, II, III (Šiuo metu organų transplantacijai svarbūs ŽLA I klasės ir ŽLA II klasės)

Kokie yra pagr ZLA I ir II klases konkreti genu vieta chromosomoje (lokusas)?

pagrindiniai I klasės genų lokusai yra ŽLA‑A, ‑B, ‑C,

o II klasės – ŽLA‑DR, ‑DQ ir ‑DP,

Kokios imunologines kliutys kyla organu transplantacijos metu?

• ABO kraujo grupių nesuderinamumas

• antikūnų prieš ŽLA (anti-ŽLA) buvimas potencialiems alotransplantacijų recipientams

Priklausomai nuo donorui specifinių anti-ŽLA (specifiškesnis pavadinimas – donor specific antibodies, DSA) stiprumo, klinikinis poveikis gali svyruoti nuo …….

švelnių reiškinių, kontroliuojamų standartine imunosupresija, iki sunkių komplikacijų – transplantato atmetimo reakcijų, įskaitant transplantato praradimą

Kokie yra atmetimo reakciju tipai?

• Šeimininkas prieš transplantatą

  • Žaibinis atmetimas (trukmė – minutės / valandos, humoralinis atsakas (jau iki transplantacijos esantys antikūnai prieš ŽLA ir/ar prieš ABO; komplementas)

  • Ūmus atmetimas (trukmė – dienos / savaitės, humoralinis ar ląstelinis atsakas)

  • Lėtinis atmetimas (trukmė – mėnesiai / metai, humoralinis ar ląstelinis atsakas)

• Transplantatas prieš šeimininką

Kaip atliekamas ŽLA (ne)suderinamumo ivertinimas? Kokie metodai?

1. Aloantikūnų prieš ŽLA paieška/nustatymas ir identifikacija (specific anti-HLA) recipiento

a) Limfocitotoksiniu metodu,

b) Luminex metodu.

2. ŽLA (audinių) tipavimas (ir recipientas, ir donoras tiriami, nustatant kraujo grupę ir ŽLA alelius (x/x dermė, alelių skaičius priklauso nuo transplantacijos rūšies))

a) Limfocitotoksiniu metodu – naudojami specifiniai monokloniniai antikūnai,

b) DNR analizė molekuliniais metodais (bus aptariama vėliau)

3. Donoro-recipiento kryžminės dermės mėginys

a) Limfocitotoksiniu metodu,

b) Tėkmės citometrijos metodu

ŽLA (HLA) suderinamumo svarba skiriasi priklausomai……

nuo to, koks organas ar audinys persodinamas.
Ne visoms transplantacijoms reikia vienodai tikslaus ŽLA sutapimo

Ar svarbus ŽLA suderinamumas inkstu, kaulu ciulpu, kepenu, ragenos ir sirdies transplantacijoms?

• inkstų transplantacijai - pakanka riboto, bet privalomo ŽLA suderinimo, privalomi. Privalomai tiriami 3 lokusai: ŽLA‑A, ŽLA‑B, ŽLA‑DR

• kaulų čiulpų transplantacijoje - ŽLA suderinamumas yra kritiškai svarbus, naudojami penkių lokusų ŽLA-A, ŽLA-B, ŽLA-C and ŽLA-DR, ŽLA-DQ aleliai (iš viso 10 ŽLA alelių)

• Kepenu transplantacijai - ŽLA derinimas – minimalus, Reikalinga tik ABO kraujo grupės dermė, ŽLA neparenkama

• Ragenos transplantacija - ŽLA nederinama

• Širdies transplantacija - ŽLA nederinama

Kas yra ŽLA tipavimas?

Tai donoro ir recipiento konkrečių HLA genų alelių nustatymas, kad būtų galima įvertinti jų imunologinį suderinamumą

Kiekvienas donoras ir recipiento asmuo privalo būti tipuoti pagal:

ŽLA-A,

ŽLA-B,

ŽLA-C,

ŽLA-DR

ŽLA-DQ

Kokie yra tipavimo metodai ir kokioms ŽLA klasems jie tinka?

1. Serologiniai (limfocitotoksiniai) - ŽLA-A ir ŽLA-B tipavimui

2. Molekuliniai (DNR pagrindu) - ŽLA-A ir ŽLA-B tipavimui ir ŽLA-C, ŽLA-DR ir ŽLA-DQ

kokiais metodais tiriami anti‑ŽLA antikūnai ir atliekamas donoro–recipiento kryžminės dermės tyrimas?

• Ląsteliniai metodai:

oLimfocitotoksinis

oTėkmės citometrija

• Kietos fazės metodai:

o Luminex

o Tėkmės citometrija

Anti-ŽLA tyrimo metodu palyginimas

Ka galima nustatyti pagal tai kokios lasteles ( T/B limfocitai) reaguoja kryzmineje dermeje?

• galima numanyti, prieš kokios klasės ŽLA antigenus yra antikūnai

• įvertinti transplantacijos riziką.

Kokia klase ekspresuoja (kokias ZLA molekules turi savo pavirsiuje) T ir B limfocitai?

T limfocitai - ŽLA I klase

B limfocitai - ŽLA I ir II klases

Kas yra teigiami donoro-recipiento kryzmes dermes meginiai?

tai kontraindikacija transplantuoti organą konkrečiam pacientui (patvirtina transplantato atmetimo didesnę riziką, kuri susijusi su trumpesniu transplantato išgyvenamumu ir transplantato praradimu) (organas tam pacientui nepersodinamas)

Donoro-recipiento kryzmines dermes meginiai gali

o padėti papildomai patikrinti donoro ir recipiento ŽLA suderinamumą,

o aptikti/nustatyti daugumą antikūnų prieš donoro ŽLA

Donoro-recipiento kryzmines dermes meginiai negali

o garantuoti normalaus transplantato išlikimo,

o užtikrinti, kad neįvyks paciento įsijautrinimas (kad paciento organizme

nesusidarys antikūnų prieš ŽLA (kitaip, antidonorinių antikūnų, DSA),

o nustatyti visų anti-ŽLA antikūnų buvimą,

o užkirsti kelio lėtinėms atmetimo reakcijoms