7.Pomiary aktywności enzymatycznej

Szybkość maleje z czasem ponieważ …

wzrost c P przesuwa równowagę reakcji w lewo

Z tego powodu w pomiarach aktywności E mierzy się jego … w warunkach reakcji rzędu …

szybkość początkową, zerowego (całkowite wysycenie E)

Medycznie aktywność E bada się w … (6)

-pł. ustrojowych

-tk.

-osoczu krwi (najczęściej)

-moczu

-płynie mózgowo-rdzeniowym

-płynie opłucnowym

Etapy powstawania surowicy: … (3)

-koagulacja krwi

-retrakcja skrzepu

-odwirowanie

Surowicą oznacza się … (ogólnie) np.: … (2)

składniki o stężeniu podobnym do tego w krwinkach i osoczu

glukoza, mocznik

Aktywność E w homogenacie tkankowym oznacza się po …

odwirowaniu konkretnych frakcji jądra (mitochondria, jądra, itp.)

Aktywność E w homogenacie zależy od … (2)

ilości E

jakości homogenizacji

Reguły aktywności w pł. biol.

J osocza i surowicy« J w tk.

J w krwinkach > J w surowicy

inhibitory i aktywatory w surowicy mogą wpływać na wyniki

chorzy mogą brać leki zmieniające J E (heparyna hamuje fosfatazy)

surowica może mieć podobnie specyficzne E lub różnie specyficzne izoE

niektóre choroby zwiększają ilość E w okresie czasu

trwałość E w pł. biol jest różna

W zapaleniu trzustki zwiększa się J …

amylazy

W zawale serca zwiększa się J …

aminotransferaz

Metody pomiaru aktywności E: … (3)

dwupunktowa, kinetyczna, ELISA

Zasady metody dwupunktowej: … (2)

pomiar c S lub P na początku i po skończeniu inkubacji

inkubacja powoduje zajście różnych złych zmian, dlatego robi się ją możliwie najkrócej

Zasady metody kinetycznej … (2)

Pomiar c S lub P w jednostce czasu na początkowym etapie reakcji

Należy ciągle rejestrować zmiany c składnika w t

Używa się wykresu prostoliniowego

Ab w ELISIE znakuje się … (2)

peroskydazą chrzanową, fluoresceiną

O aktywności E w ELISIE informuje …

intensywność zabarwienia studzienki

Definicja międzynarodowej jednostki enzymatycznej (U): …

ilość E katalizująca przemianę 1mikromol

S w ciągu 1min. W T=30*C i optymalnych warunkach

U wyraża się w … lub …

mikromol/min, mikromol/ml

Definicja katala (kat) …

ilość E katalizująca przemianę 1mol S w 1s w warunkach optymalnych

Jednostka katala to …

mol/s

Aktywność właściwa to …

ilość U przypadających na 1mg białka

Aktywność molekularna to …

ilość mikromoli S zmienionego w 1min przez 1mikromol E

Aktywność właściwa stanowi miarę …

oczyszczenia białka

Prawidłowa preparacja przejawia się …

stałym wzrostem aktywności właściwej

W diagnostyce klinicznej używa się … i … (jednostki)

U, aktywność właściwa