prueba 1 II instrumental

HPLC vs GC (fase móvil)

En HPLC la fase móvil es líquida, en GC la fase móvil es gaseosa e inerte

columna capilar (función principal)

Ocurre la separación cromatográfica en base a volatilidad e interacción con la fase estacionaria

Capas columna capilar (externa)

Formada por poliamida externa sílice fundida (sólida) y fase estacionaria (semilíquida)

Columna capilar (intermedia)

Flexible para enrollarse

Columna capilar (interna)

Diámetro muy pequeño

Tipos de columnas capilares

SCOT PLOT y WCOT

Largo de columna capilar

Aproximadamente 30 m algunas hasta 100 m

Inyector en GC

La muestra se volatiliza

Lugar de separación en GC

En la columna capilar

Técnica de cuantificación cromatográfica

Usando el área bajo la curva

Fase móvil en cromatografía de gases

Un gas

Gas portador (definición)

Transporta los analitos

Detector FID

Detector de ionización de flama detecta hidrocarburos (detecta enlaces covalentes O-H)

Detector ECD

Detector selectivo para compuestos halogenados

Detector NPD

Detector selectivo para compuestos con N y P

Ubicación de la columna capilar en GC

Dentro del horno del equipo

Problema al calentar columna capilar

Puede ocurrir ruptura

Muestra muy concentrada (solución)

Abrir la válvula Split

Tipos de cromatografía de partición

Fase normal y fase reversa

Elución en fase reversa (analitos polares)

Los analitos polares eluyen primero

Funciones de la fase móvil

Ajustar fuerza iónica polaridad y pH

Mejorar resolución y reducir tiempo de elusión

Usar un gradiente de solventes

Presión en UPLC

Puede alcanzar hasta 1000 atm

Fase estacionaria en HPLC

Octodecil (C18)

Preparación de solventes en HPLC

Filtrar y desgasificar

HPLC (significado)

Cromatografía Líquida de Alta Resolución

Material tuberías en HPLC

Acero inoxidable

Fase reversa en HPLC

Fase estacionaria apolar

Requisitos del detector (1)

Alta sensibilidad

Detector DAD

Permite medir múltiples longitudes de onda simultáneamente y generar cromatograma bidimensional

Detector UV-Vis

Mide absorbancia en una sola longitud de onda seleccionada

Programa de temperatura (isoterma)

Tramo a 40 °C constante

Programa de temperatura (rampa)

10 °C/min corresponde a rampa de temperatura

Orden de elución en fase reversa (polaridad A>B>C)

C-B-A (el menos polar eluye primero el más polar al final)