Week 3 FA-BA 204 - Biologische Geneesmiddelen

Wat zit in het vector ontwerp voor prokaryote cellen?

Bacterie promotor + selectiemarker, bacterie promotor + gen van geneesmiddel en ORI.

Wat zit er in het vector ontwerp voor eukaryote cellen?

Bacterie promotor + selectiemarker, zoogdierpromotor + gen van geneesmiddel, ORI, zoogdierpromotor + selectiemarker, KOZAK sequentie, poly A signaal en zoogdier enhancer sequentie.

Transformatie

Plasmide DNA wordt in de cel gebracht door deze poreus te maken via heat shock of electric shock.

Transductie

Een virus brengt DNA in cellen.

Transfectie

Overkoepelende term voor verschillende manier om DNA in de cel te krijgen.

Wat houdt antibioticaselectie in?

Als het gen is opgenomen is de bacterie resistent, als het gen niet is opgenomen is de bacterie niet resistent. Na behandeling met antibiotica houd je alleen de bacteriën over die het gen van interesse tot expressie brengen. Wordt meestal in laboratoria gebruikt.

Wat houdt methotrexaatselectie in?

Selectie op basis van aanvulling van DHFR. DHFR is nodig voor de aanmaak van nuceotiden en wordt competitief geremt door methotrexaat. Hoe meer DHFR, hoe hoger de expressie. Wordt meestal in industriële setting gebruikt.

Klonale drift

Cellen gaan zich anders gedragen door leeftijd (passagenummer)

Wat zit er in celkweek media?

Glucose, buffer, zouten, vitamines, groeifactoren

Wat zijn, naast voedingsstoffen, de belangrijkste parameters voor het groeien van cellen?

Zuurstof, afvoer van afvalstoffen, pH, zoutconcentraties, celdichtheid en temperatuur.

Wat zijn de fases van celgroei?

Lag phase, log phase, stationairy phase en death phase

Batch bioreactor

Gesloten bioreactor waar niks toegevoegd of afgevoerd kan worden.

Fed batch bioreactor

Bioreactor waar vers medium aan toegevoegd kan worden, maar niks afgevoerd kan worden.

Perfusie bioreactor

Bioreactor met continue aanvoer en afvoer.

Seed train

Kleine stappen die langzaam de productieschaal verhogen.

Wat is het verschil tussen suspensiecellen en adherente cellen?

Suspensiecellen groeien in 3D, dus midden in een suspensie. Adherente cellen groeien in 2D, dus op een vast oppervlak.

Welke aanpassingen kunnen worden gemaakt voor adherente celkweek?

Een wave bioreactor of drager deeltjes kunnen worden ingezet.

Wave bioreactor

Bioreactor waarbij het medium over de cellen golft. Wordt gebruikt bij adherente celkweek.

Waarom kan je niet elk geneesmiddel door elk type cel laten maken?

Glycosylering verschilt per cel en complexe eiwitvouwing is niet mogelijk in elke cel.