Mikrobiologia - Laby - API

Halyna, mam zawał...

To gotowe testy komercyjne umożliwiające szybką identyfikację mikroorganizmów chorobotwórczych.

Czym są API?

Składa się z plastikowego paska testowego ze studzienkami zawierającymi różne rodzaje podłóż.

• umożliwiają one zbadanie jednej cechy metabolicznej.

Co składa się na API?

Czynniki wykrywane przez API:

1. Wytwarzanie beta-galaktoksydazy;

6. Wytwarzanie H2S;

7. Wytwarzanie ureazy;

8. Wytwarzanie deaminazy tryptofanu;

9. Wytwarzanie indolu;

10. Wytwarzanie acetoiny;

11. Wytwarzanie żelatynazy;

20. Wytwarzanie oksydazy cytochromowej.

Opisz, co pozwala wykryć API identyfikujące bakterie z rodziny Enterobacteriaceae.

Skup się na czynnikach wytwarzanych.

12. Fermentacja glukozy;

13. Fermentacja mannozy;

14. Fermentacja inozytolu;

15. Fermentacja sorbitolu;

16. Fermentacja ramnozy;

17. Fermentacja sacharozy;

18. Fermentacja amigdaliny;

19. Fermentacja arabinozy;

Opisz, co pozwala wykryć API identyfikujące bakterie z rodziny Enterobacteriaceae.

Skup się na czynnikach fermentowanych.

2. Dekarboksylacja argininy;

3. Dekarboksylacja lizyny;

4. Dekarboksylacja ornityny;

5. Wykorzystanie cytrynianu;

Opisz, co pozwala wykryć API identyfikujące bakterie z rodziny Enterobacteriaceae.

Skup się na czynnikach innych niż wytwarzanie i fermentacja.

1. Do studzienek dodaje się zawiesinę bakterii i inkubuje w odpowiednich warunkach;

2. Wynik odczytuje się na podstawie zmiany koloru hodowli lub dodanego odczynnika, a znaczenie odczytuje się z dołączonej przez producenta tabeli;

3. Tabela pozwala na odczytanie siedmiocyfrowego kodu pozwalającego na identyfikację bakterii.

Jaka jest procedura przeprowadzania testów API?

1. Plastikowe płytki z dołkami zawierającymi pożywki o różnych składach i bezbarwny chlorek trifenylotetrazoliowy;

2. Urządzenie przeprowadzające inkubację i odczyt wyników;

3. Oprogramowanie bioinformatyczne interpretujące wynik.

Wymień elementy składające się na Biolog Automated System.

Materiał badawczy zawieszony w odpowiednim buforze wprowadza się do dołków płytki i inkubuje w odpowiednich warunkach.

Jeżeli w danym dołku są składniki umożliwiające wzrost, to bakterie prowadzą metabolizm, produkująć NADH.

NADH reaguje z chlorkiem trifenylotetrazoliowym tworząc fioletowy trifenyloformozan. Urządzenie automatycznie bada zmiany absorbancji.

Pomiar zmian absorbancji pozwala określić zdolność mikroorganizmów do wykorzystywania różnych źródeł podstawowych pierwiastków biogennych.

Jak przebiega proces diagnostyczny Biolog Automated System.

To proces prowadzący do zabicia lub usunięcia wszystkich mikroorganizmów wraz z ich formami przetrwalnikowymi.

Czynniki zabijające bakterie to czynniki bakteriobójcze.

Czynniki hamujące wzrost bakterii to czynniki bakteriostatyczne.

Czym jest sterylizacja?

Jak nazywają się czynniki zabijające i hamujące wzrost bakterii?

1. Wysoka temperatura;

   • gorąca para wodna;

   • suche, gorące powietrze;

   • palący się etanol;

   • bezpośredni płomień palnika;

2. Filtracja;

3. Promieniowanie;

4. Wysokie ciśnienie hydrostatyczne.

Wymień fizyczne metody sterylizacji.

Autoklawowanie to poddanie powierzchni, podłóż i odczynników działaniu pary wodnej o temperaturze 110-121^oC w zamkniętej komorze o podwyższonym ciśnieniu przez czas powyżej 20 min;

• czas może ulegać wydłużeniu w przypadku większych przedmiotów, by osiągnęły one wymaganą temperaturę na całej powierzchni.

Przebieg postępowania podyktowany jest tym, że taki rodzaj ekspozycji gwarantuje zabicie wszystkich bakterii i form przetrwalnikowych.

Sama ekspozycja na działanie temperatury 100^oC nie gwarantuje zabicia wszystkich form przetrwalnikowych bakterii

Opisz na czym polega autoklawowanie.

Wyjaśnij co zmusza do takiego postępowania.

1. Podłoża złożone (np. agar odżywczy);

2. Bufory;

3. Wodę destylowaną, roztwór soli fizjologicznej;

4. Szkło, przedmioty plastikowe, narzędzia chirurgiczne;

5. Odporne termicznie przedmioty gumowe;

6. Opatrunki.

Co poddaje się sterylizacji poprzez autoklawowanie?

To metoda sterylizacji wykorzystująca aparat Kocha, a polegająca na trzykrotnym ogrzaniu obiektu bieżącą parą wodną o temperaturze 100^oC. Każda sterylizacja powinna następować w odstępie 24h po poprzedniej.

Mechanizm polega na zabiciu form wegetatywnych w pierwszym ogrzaniu, kiełkujących form przetrwalnikowych w drugim, i pozostałych mikroorganizmów w trzecim ogrzewaniu.

Opisz czym jest tyndalizacja oraz w jakim urządzeniu się ją przeprowadza.

Opisz również mechanizm tyndalizacji.

Do jałowienia materiałów umożliwiających kiełkowanie form przetrwalnikowych, takich jak wodne roztwory:

• cukrów;

• aminokwasów;

• zasad azotowych;

• witamin.

Do jałowienia jakich obiektów wykorzystuje się tyndalizację?

Polega na poddaniu obróbce termicznej poprzez umieszczenie w wodzie o temperaturze 100^oC przez 30 min - pozwala to na zabicie wszystkich form wegetatywnych mikroorganizmów.

Skuteczność procesu można zwiększyć przez dodanie różnych soli np. 2% Na₂CO₃ lub CaCl₂.

Na czym polega gotowanie?

Co zwiększa jego skuteczność?

Polega na ogrzaniu płynu:

• do temperatury 62^oC przez 30 min (batch method);

• do temperatury 72^oC przez 16 sekund (flash method);

  • lepsza metoda - krótszy czas mniej psuje smak; wyższa temperatura skuteczniej zabija mikroorganizmy.

Następnie płyn szybko się schładza w celu ochrony przed denaturacją składników płynu.

Scharakteryzuj proces pasteryzacji.

Określ również warunki, w jakich przeprowadza się proces.

UHT (Ultra High Temperature)

Mleko przepuszczane jest przez cienkie rurki, w których jest szybko ogrzewane do 134^oC, i po 1-2 sekundach bardzo szybko chłodzone.

Nazwij współczesną metodę przemysłowej pasteryzacji mleka.

Wytłumacz również techniczny aspekt metody.

Przeprowadzana jest w sterylizatorach zwanych “suszarkami”.

Prowadzi się ją przez:

• 1,5h w temperaturze 160^oC;

• 1h w temperaturze 170-180^oC.

Służy do jałowienia szkła lub przedmiotów metalowych (narażonych na korozję w autoklawie).

Opisz metodę sterylizacji suchym, gorącym powietrzem.

Określ, w jakich warunkach jest przeprowadzana.

Wyjaśnij również, kiedy znajduje zastosowanie.

Bezpośrednio w płomieniu palnika wyżarza się metalowe ezy, oraz krańce probówek.

Dodatkowo przez płomień palnika przeprowadza się głaszczki zanurzone w alkoholu.

Opisz zastosowania metody sterylizacji bezpośrednio w płomieniu palnika.

Opisz też metodę pośredniej sterylizacji w płomieniu palnika.

Metoda polega na przepuszczeniu płynów lub gazów przez filtr posiadający pory o średnicy 0,22

Opisz sposób sterylizacji przez filtrację.