Polimerazinė grandininė reakcija (PGR) ir elektroforezė

Polimerazinė grandininė reakcija (PGR)

In vitro DNR replikacijos procesas, kurio metu gaunami milijonai dominančio DNR regiono kopijų.

DNR grandinė

Pradinis DNR šablonas, kurio informacija naudojama sintetinant naujus DNR fragmentus.

DNR polimerazė

PGR dalyvaujantis fermentas, kuris vykdo DNR replikaciją.

Pradmenys

Trumpi DNR fragmentai, komplimentarūs DNR šablonui, kurie suteikia pradžią polimerazei prisijungti.

Nukleotidai (dNTP)

Statybinė medžiaga, kurius polimerazė jungia prie naujo DNR.

Termocikleris

Prietaisas, kuris periodiškai keičia reakcijos tirpalo temperatūrą PGR.

Elektroforezė

DNR vizualizavimo metodas, grindžiamas DNR fragmentų atsiskyrimu pagal jų molekulinį dydį bei krūvį.

Agarozės milteliai

Reagentas, naudojamas DNR fragmentų atskyrimui elektroforezės metu.

Buferis

Tirpalo komponentas, palaikantis pastovią pH reikšmę elektroforezė.

Etidžio bromidas

Mutagenas ir fluorescencinis dažas, naudojamas DNR vizualizacijai, dirbant su kuriuo reikia mūvėti pirštines.

Masės standartas

Žinomo ilgio DNR fragmentai, naudojami lyginant su tiriamaisiais fragmentais.

PGR taikymai

Nustatyti genetines ligas, polinkį į ligas, infekcines ligas, identifikuoti rūšį/organizmą/asmenį ir biologinius vaiko tėvus.

DNR denatūravimas

Etapas, kai tirpalas kaitinamas iki 95 laipsnių, kad dviguba spiralė išsiskirtų į viengrandes DNR grandines.

Elongacija

Etapas, kai polimerazė prisijungia prie pradmenų ir sintetina naują DNR pagal DNR seką. 72 laipsniai.

PGR proceso pradmenų prikabinimas etapas (temperatūra)

Aplink 50-65°C, kur pradmenys prisijungia prie viengrandžių DNR.

Temperatūros poveikis produkcijai

Neteisinga temperatūra PGR etapuose gali sukelti mažesnį produktų kiekį ar netikslumus kopijose.

Thermus Aquaticus (Taq)

karštį toleruojanti bakterija, randama karštuose šaltiniuose, naudojama PGR dėl savo DNR polimerazės, kuri yra stabilios aukštoje temperatūroje ir efektyvi DNR replikacijos procese.

Reakcijos dalys

DNR grandinė, DNR polimerazė, Pradmenys, Nukleotidai, Buferinė sistema, Termocikleris

Kiek kartų kartojasi PGR reakcija

25-40. Jos metu dvigubėja grandinių sk

Elektroforezės reagentai

Agarozės milteliai, Buferis, Fluorescencinis dažas, Leidimo dažas, masės žymuo

Elektoforezės įranga

Mikrobangų krosnelė, Elektroforezės aparatas, Transiluminatorius

Ką daro druskos?

Buferiniuose tirpaluose (TBE, TAE) esančios druskos užtikrina laidumą