Biotecnologie Diagnostiche e Terapeutiche - Flashcard Vocabolario

Flashcard di vocabolario sulle biotecnologie diagnostiche e terapeutiche, basate sul testo delle lezioni.

Mutagenesi in vivo

Processo di mutagenesi casuale condotto su microrganismi fatti crescere in presenza di agenti mutageni chimici o fisici, selezionando successivamente le mutazioni che conferiscono un vantaggio.

Frammento di Klenow

Forma modificata della DNA polimerasi I di E. coli priva dell'attività esonucleasica $5' \rightarrow 3'$, impiegata nella sintesi del secondo filamento di DNA durante la mutagenesi sito-specifica.

Metodo mega-primer

Tecnica di mutagenesi basata su due reazioni di PCR consecutive, in cui il prodotto della prima amplificazione (ottenuto con un primer mutato) viene purificato e utilizzato come primer nella seconda reazione.

Overlap extension

Metodo di mutagenesi basato su una reazione di PCR multiplex con $4$ primer ($A$, $B$, $C$, $D$), che genera due frammenti sovrapposti contenenti la mutazione, denaturati e rinaturati a formare ibridi completati in una seconda PCR.

Maturazione della proinsulina

Processo mediante il quale la pre-proinsulina ($110\,\text{aa}$) perde la sequenza leader diventando proinsulina ($86\,\text{aa}$), forma i ponti disolfuro e subisce il taglio proteolitico del peptide C di connessione, rilasciando l'insulina attiva ($51\,\text{aa}$).

Insulina Glargine

Analogo dell'insulina ad azione protratta formulato a pH $4$, in cui un'asparagina della catena A è sostituita con una glicina e sono aggiunte due arginine all'estremità C-terminale della catena B.

Pegvisomant

Farmaco antagonista dell'ormone della crescita (hGH) caratterizzato da sostituzioni amminoacidiche e coniugazione con molecole di PEG, capace di saturare i recettori del GH senza trasdurre il segnale.

Corifollitropina alfa

Ormone FSH ricombinante ad azione prolungata (Long acting FSH) ottenuto fondendo la coda C-terminale iperglicosilata dell'hCG alla subunità $\beta$ dell'FSH umano, portando l'emivita plasmatica a circa $65\,\text{ore}$.

Aldesleukina

Forma ricombinante dell'interleuchina 2 (IL-2) prodotta in E. coli, priva dell'alanina N-terminale e con la cisteina $125$ sostituita con una serina per prevenire l'aggregazione in corpi di inclusione.

Anakinra

Antagonista ricombinante del recettore dell'interleuchina 1 (IL-1Ra) prodotto in E. coli, utilizzato nel trattamento dell'artrite reumatoide per inibire la dimerizzazione del recettore IL-1R con la proteina accessoria AcP.

Eritropoietina (EPO)

Citochina e fattore di crescita emopoietico secreto da rene e fegato che stimola la produzione di eritrociti; possiede $4$ siti di glicosilazione ($3$ N-legati e $1$ O-legato) essenziali per la sua attività biologica in vivo.

Attivatore tissutale del plasminogeno (t-PA)

Serino-proteasi endoteliale che catalizza il taglio proteolitico del plasminogeno inattivo in plasmina attiva, degradando la fibrina e promuovendo la dissoluzione dei trombi ematici.

Dornasi alfa

Desossiribonucleasi (DNAsi) umana ricombinante prodotta in cellule CHO, somministrata via aerosol nei pazienti con fibrosi cistica per idrolizzare il DNA libero e fluidificare il muco broncopolmonare.

Imiglucerasi

Forma ricombinante dell'enzima $\beta$-glucocerebrosidasi prodotta in cellule CHO, somministrata come terapia di sostituzione enzimatica nei pazienti affetti da malattia di Gaucher.

Ibridoma

Linea cellulare immortalizzata creata dalla fusione tra un linfocita B di topo e una cellula tumorale di mieloma difettiva per l'enzima HGPRT, selezionata in terreno HAT per produrre anticorpi monoclonali.

Anticorpi a singola catena (scFv)

Frammenti ricombinati di anticorpi costituiti dai soli domini variabili della catena pesante ($V_H$) e leggera ($V_L$) collegati da un flessibile peptide linker.

Phage display

Tecnica basata sull'espressione di proteine o frammenti anticorpali (es. scFv) fusi alla proteina del gene 3 del fago M13, usata per selezionare cloni specifici mediante cicli di affinità per l'antigene (panning).

Strutture e formati anticorpali ricombinanti

Insieme di frammenti ed ingegnerizzazioni derivate da immunoglobuline (es. scFv, Fab, Minibody, Diabody, Bis-scFv, Triabody, Tetrabody) caratterizzate da dimensioni ridotte, valenza variabile o bispecificità.

Vettore vaccinale Vaccinia virus

Poxvirus a dsDNA capace di replicare nel citoplasma, ingegnerizzato mediante ricombinazione omologa per esprimere antigeni eterologhi e selezionato con bromodeossiuridina in cellule difettive per la timidina chinasi.

CRISPR/Cas9

Sistema di gene editing costituito da una nucleasi Cas9 e da un RNA guida (sgRNA) complementare al target, capace di produrre rotture a doppio filamento ($dsDNA$) sito-specifiche.

Induced pluripotent stem cells (iPSC)

Cellule staminali pluripotenti generate da cellule somatiche adulte mediante la riprogrammazione genetica ottenuta con i quattro fattori di trascrizione OSKM (Oct4, Sox2, cMyc, Klf4).

Dot Blot

Metodo diagnostico di ibridazione molecolare in cui il campione di acido nucleico non separato elettroforeticamente viene immobilizzato su una membrana mediante aspirazione a vuoto.

Hot start PCR

Metodo di PCR che impiega una Taq polimerasi inattivata da anticorpi o aptameri e attivata solo dopo un'iniziale denaturazione termica a circa $95\,^{\circ}\text{C}$, eliminando amplificazioni aspecifiche e dimeri di primer a freddo.

Nested PCR

Reazione di amplificazione condotta in due fasi successive con due coppie di primer differenti (esterni ed interni), volta ad aumentare notevolmente la sensibilità e la specificità della PCR.

Ciclo soglia ($C_t$)

In PCR quantitativa Real-Time, indica il ciclo di amplificazione al quale l'emissione di fluorescenza supera la linea di soglia (threshold), con un valore inversamente proporzionale alla concentrazione iniziale di DNA.

Sonde Molecular Beacons

Sonde oligonucleotidiche a struttura di forcella (hairpin) recanti un fluoroforo e un quencher alle estremità, che emettono fluorescenza soltanto quando si distendono ibridandosi al DNA target.

Ligase Chain Reaction (LCR)

Tecnica diagnostica che impiega due coppie di primer adiacenti e una DNA ligasi termostabile per unire le sonde solo in assenza di mismatch al sito polimorfico.

NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification)

Tecnica di amplificazione isotermica dell'RNA condotta a temperatura costante mediante l'azione sinergica di Trascrittasi Inversa, RNAsi H e T7 RNA Polimerasi.

Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE)

Tecnica elettroforetica a campi elettrici pulsati e polarità alternata usata per separare grandi frammenti di DNA genomico derivati da tagli con enzimi di restrizione a frequenza rara.

Protein Truncation Test (PTT)

Saggio diagnostico in vitro di trascrizione e traduzione basato su amplificato PCR, impiegato per identificare mutazioni che inseriscono codoni di stop prematuri rilevando la riduzione del peso molecolare della proteina su SDS-PAGE.

Meccanismi genetici della Sindrome di Angelman

Eziologia molecolare non mendeliana causata dalla perdita di espressione dei geni materni sul cromosoma 15q13, riconducibile a delezione materna ($65\text{--}75\%$), disomia uniparentale paterna ($3\text{--}7\%$), mutazione di UBE3A ($5\text{--}11\%$) o difetti dell'imprinting ($3\%$).