1. Mikroskopy

Wymień 3 rodzaje preparatów mikroskopowych:

• Skrawki
• Szlify
• Rozmazy
• Rozgnioty
• Odciski narządowe
• Hodowle komórkowe

Cechy dobrego utrwalacza:

• szybko przenika w głąb tkanek
• powoduje szybką stabilizację struktur wewnątrzkomórkowych , głównie przez denaturację białek nie niszczy struktur wewnątrzkomórkowych
• jest izotoniczny w stosunku do płynu tkankowego
• mało toksyczny dla otoczenia

Jaki obraz powstaje w mikroskopie świetlnym :

powiększony, pozorny, odwrócony

Utrwalacze chemiczne dzielimy na:

• proste (jednoskładnikowe)
• złożone (Bouina, Carnoya, Zenkera)

Jaki jest mechanizm immunohistochemii pośredniej :

• pierwotne przeciwciało łączy się z antygenem znakowane przeciwciało wtórne reaguje z tym pierwotnym

ogółem bardziej czuła • Immunohistochemia pośrednia stosuje nieznakowane przeciwciało pierwszorzędowe , które po związaniu ze swoistym antygenem wykrywane jest za pomocą znakowanego przeciwciała drugorzędowego
• Pośrednia metoda immunohistochemiczna jest powszechniej używana, ponieważ zastosowanie dodatkowego poziomu wiązania przeciwciała wzmacnia sygnał detekcji i zapewnia większą uniwersalność metody pod względem technicznym

Jaka jest graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu optycznego?

Graniczna zdolność rozdzielna mikroskopu optycznego to 0,2 mikrometra

Jakie są zalety techniki parafinowej:

• powszechnie stosowana
• umożliwia pozyskanie skrawków cienkich oraz seryjnych
• szybka 1-3 dni
• niski koszt pojedynczego preparatu

Wady techniki parafinowej :

• Wysoka temperatura zatapiania - 50-60 stopni Celsjusza
· konieczność używania rozpuszczalników jak alkohol, ksylen
• kruszenie i rozwarstwianie skrawków przy materiałach twardych lub organicznych o niejednorodnej strukturze
• znaczne ograniczenia przy krojeniu skrawków o dużej powierzchni

Co się składa na całkowite powiększenie mikroskopu?

Całkowite powiększenie mikroskopu to iloczyn powiększeń obiektywu, okularu i pośredniego układu optycznego

Jakie są barwniki fluorescencyjne?

• Fluorochromy: oranż akrydyny, fluoresceina, rodamina
• Substancje z fluorescencją własną tj . endogenną : witamina A, chlorofil, lipofuscyna czy porfiryny

Czym spowodowane jest powiększenie puste mikroskopu?

Powiększenie puste spowodowane jest zwiększeniem P okularu bez zmiany apertury obiektywu (obraz powiększa się bez dodania rozdzielczości)

Na czym polega zjawisko fluorescencji?

Fluorescencja to emitowanie światła pod wpływem naświetlania UV

Wymień 3 części należące do zespołu optycznego mikroskopu:

• źródło światła filtry
• przesłona
• kondensor
• obiektyw
• pośrednie układy optyczne
• okulary

Na czym polega barwienie metachromatyczne metachromazja?

Struktury barwią się na kolor odmienny od barwnika np. ziarna komórek tucznych wybarwiają się na różowo - fioletowo od błękitu toluidyny

Co to jest barwienie przeżyciowe?

Używanie barwnika o znikomej toksyczności i wprowadzanie go do żywego organizmu lub komórki np. zieleń Junasowa, tucz chiński, błękit toluidyny i metylenowy oraz czerwień obojętna

Jakie są elementy mechaniczne mikroskopu:

• Podstawa
• Statyw
• stolik pomiarowy
• Tubus
• Urządzenie rewolwerowe
• Śruby makro- i mikrometryczne

Jaki mikroskop pozwala zbadać stężenie Ca2+ i H+ ?

Stężenie Ca2+ i H+ pozwala zbadać współogniskowy (konfokalny) skaningowy mikroskop świetlny

Wymień barwniki zasadowe i co barwią :

• Hematoksylina, błękit metylenowy
• barwią np . jądro komórkowe

Wymień barwniki kwaśne i co barwią:

• Eozyna oranż G
• Barwią np. kolagen i białka cytoplazmatyczne

Jakie jest źródło światła w mikroskopie konfokalnym?

Laser

Jaka jest budowa okularu, a jakie jego funkcje?

• Okular powiększa obraz i rzutuje go na siatkówkę obserwatora , ale nie poprawia rozdzielczości
• Kolektyw i soczewka okularowa z jedną lub kilkoma diafragami
• Budowa: składa się z dwóch płasko - wypukłych soczewek

Na czym polega barwienie polichromatyczne:

Jest wtedy kiedy efekt barwienia jest wypadkową działania mieszaniny barwników kwaśnych i zasadowych np. barwienie krwi metodą May Grunwald

Czym jest zdolność rozdzielcza mikroskopu?

• Zdolność rozdzielcza to najmniejsza odległość dzieląca dwa punkty, które dostrzegamy jako oddzielne
• Zależy od długości fali i apertury

Jaki jest mechanizm immunohistochemii bezpośredniej?

• Jeżeli antygen będący przedmiotem zainteresowania jest wykrywany w komórce lub tkance przez bezpośrednie wiązanie się ze znakowanym przeciwciałem pierwszorzędowym swoistym względem tego antygenu , proces ten określa się jako immunohistochemię bezpośrednią
• jednostopniowa, tania

Na czym polega barwienie polichromatyczne?

• Polega na barwieniu mieszaniną barwników zasadowych i kwaśnych (np. May Grunwalda Glemsa, barwienie hematoksylina + eozyna)

Jaka jest graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu kontrastowo - fazowego ?

• Graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu kontrastowo - fazowego to 0,2 mikrometrów

Jaka jest graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu świetlnego?

Graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu świetlnego wynosi 0,2 mikrometrów

Co można wykryć za pomocą lektyn ?

Za pomocą lektyn można typować szczepy bakterii Gram ujemnych

Czym jest barwienie H + E?

Barwienie H + E to barwienie hemotoksyliną i eozyną . Jest to przykład barwienia polichromatycznego . Hemotoksylina wybarwia DNA w jądrze komórkowym , bogate w RNA obszary cytoplazmy oraz macierz chrząstki , a eozyna to barwnik kontrastowy , który wybarwia pozostałe struktury cytoplazmatyczne i barwi kolagen na różowo pozwalając rozpoznać dodatkowe cechy tkanki

Jaka jest funkcja mikrotomu?

Mikrotom to urządzenie służące do skrajania i trymowania stwardniałych bloczków z tkanką w celu dokładnego badania mikroskopowego

Jaka jest graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu konfokalnego ?

Graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu konfokalnego to 0,2 mikrometra

Jaką metodą wybarwia się węglowodany?

Węglowodany wybarwia się metodą kwas nadjodowy - odczynnik Schiffa (PAS)

Wyjaśnij na czym polega badanie in situ ?

Badanie in situ pozwala na swoistą identyfikację sekwencji w genach lub RNA . DNA i RNA analizowanych komórek muszą być na wstępie zdenaturowane przez ogrzanie lub działanie innych środków , aby stały się całkowicie jednoniciowe . Będące przedmiotem badania sekwencje nukleotydowe są wykrywane za pomocą sondy , która składa się z jednoniciowego , komplementarnego DNA ( cDNA ) . Sondę można otrzymać poprzez klonowanie , przez namnożenie sekwencji docelowej w reakcji łańcuchowej polimerazy ( PCR ) lub za pomocą syntezy chemicznej , o ile pożądana sekwencja jest krótka . Sonda jest znakowana nukleotydami zawierającymi izotop radioaktywny ( lokalizowany za pomocą autoradiografii ) lub modyfikowanymi niewielkimi związkami takimi jak digoksygenina ( rozpo- znawanymi za pomocą immunohistochemii ) . Roztwór zawierający sondę umieszcza się na preparacie w warunkach umożliwiających hybrydyzację , a po odpłukaniu nadmiaru niezwiązanej sondy lokalizacja zhybrydyzowanej sondy uwidaczniana jest za pomocą jej znacznika

Jaka jest graniczna zdolność transmisyjnego mikroskopu elektronowego?

Graniczna zdolność mikroskopu elektronowego wynosi ok. 3 nm

W jakim mikroskopie wykonuje się krioskrawanie?

Do skrawania bloczka z zamrożoną tkanką stosowany jest mikrotom umieszczony w komorze mrożeniowej - kriostat. Uzyskane skrawki mrożeniowe umieszczane są na szkiełkach, poddawane szybkiemu barwieniu i analizowane pod mikroskopem transmisyjnym elektronowym

Jaką grubość powinny mieć skrawki w mikroskopii optycznej?

Skrawki parafinowe przeznaczone do mikroskopii świetlnej zazwyczaj tnie się na grubość 3-10 μm

Jaką grubość powinny mieć skrawki w mikroskopii elektronowej?

Skrawki parafinowe przeznaczone do mikroskopii elektronowej tnie się na grubość poniżej 1 μm

W jakim celu utrwala się tkanki?

Tkanki utrwala się w celu zapobiegania jej degradacji przez enzymy uwolnione z komórek lub mikroorganizmów

Jakie jest działanie mikroskopu konfokalnego i jakie przynosi korzyści?

Mikroskopia konfokalna pozwala osiągnąć wysoką rozdzielczość i ostrość za pomocą małej punktowej wiązki światła o wysokiej intensywności , najczęściej generowanej przez laser oraz przesłony w postaci płytki z bardzo małym otworem - przesłony konfokalnej - zlokalizowanej przed detektorem obrazu. Punktowe źródło światła , ogniskowa soczewki i przesłona detektora są ze sobą optycznie sprzężone , czyli położone względem siebie w płaszczyźnie ogniskowej obiektywu (płaszczyźnie konfokalnej). Uniemożliwia to przejście przez przesłonę konfokalną światła niezogniskowanego, czyli pochodzącego z innej płaszczyzny próbki. Poprawia to znacznie rozdzielczość obserwowanego obiektu i pozwala na lokalizację składników preparatu z dokładnością znacznie większą niż w przypadku mikroskopu jasnego pola.

Jaki związek można zbadać w autoradiografii stosując tymidynę znakowaną trytem?

Zastosowanie radioaktywnego prekursora DNA (np. takiego jak znakowana trytem tymidyna) umożliwia ustalenie, które komórki danej tkanki (i jaka ich liczba) replikują DNA i przygotowują się do podziału. Możliwe jest także analizowanie dynamicznych procesów komórkowych

Co barwi Sudan?

Sudan (czerń sudanowa) barwi lipidy na czerwony kolor

Co wykrywa falloidyna?

Falloidyna barwi silnie reaguje z aktyną (białkiem mikrofilamentów), dzięki czemu pomaga pokazać ogólny kształt i strukturę komórki Falloidyna jest wykorzystywana w mikroskopii fluorescencyjnej

Jaka jest zdolność rozdzielcza TEM?

Zdolność rozdzielcza transmisyjnego mikroskopu elektronowego to ok. 3 nm

Czym się różni TEM od SEM?

W TEM wiązka elektronów, skupiona za pomocą elektromagnetycznych soczewek przechodzi przez skrawek tkankowy tam, gdzie elektrony przeszły swobodnie jest jasno. W przeciwieństwie do TEM elektrony nie przechodzą ale się odbijają, dlatego osusza się powierzchnię i powleka cienko metalem ciężkim (np. złotem), a obraz ukazuje trójwymiarową strukturę

Jaka jest graniczna rozdzielczość mikroskopu polaryzacyjnego?

Graniczna zdolność rozdzielcza mikroskopu polaryzacyjnego wynosi 0,2 mikrometra

Jaki związek utrwala skrawki w mikroskopie elektronowym?

Utrwalaczem są jony metali ciężkich tj. czterotlenek osmu, cytrynian ołowiu i związki uranylu (TEM) czy złoto (SEM)

Jakie związki można wykryć w autoradiografii?

Autoradiografia mikroskopowa jest metodą polegającą na lokalizowaniu w komórkach lub skrawkach tkankowych nowo syntezowanych makrocząsteczek. Po wniknięciu do żywych komórek radioaktywnie znakowane metabolity (nukleotydy, aminokwasy, cukry) wbudowywane są w określone makrocząsteczki (DNA, RNA, białka, glikoproteiny i polisacharydy) i emitują słabe promieniowanie, które ograniczone jest do rejonów, w których występują te makrocząsteczki

Na czym polega zatapianie?

Przesycone parafiną tkanki umieszczane są w niewielkich formach, zalewane roztopioną parafiną pozostawione do stwardnienia

Co to jest prześwietlenie w tworzeniu preparatu mikroskopowego?

Alkohol jest usuwany za pomocą rozpuszczalników organicznych, które mają właściwość mieszania się zarówno z alkoholem, jak iz parafiną

Co to jest utrwalanie preparatu mikroskopowego?

Małe kawałki tkanki umieszczane są w roztworach związków chemicznych, które sieciują białka i inaktywują enzymy degradujące, co umożliwia zachowanie struktury komórek i tkanek

Co to jest odwadnianie preparatu mikroskopowego?

Tkanka przeprowadzana jest przez szereg roztworów alkoholu o rosnącym stężeniu aż do blisko 100 % alkoholu , co usuwa z niej całkowicie wodę

Co to jest przepajanie preparatu mikroskopowego?

Tkanka umieszczana jest w roztopionej parafinie aż do czasu całkowitego przepojenia tkanki

Co to jest trymowanie preparatu mikroskopowego?

Uzyskane bloczki parafinowe są wstępnie przycinane w celu uwidocznienia tkanki przeznaczonej do krojenia za pomocą mikrotomu .

Co wykrywa białko A?

Wiąże się z regionem Fc cząsteczki przeciwciała i może być zastosowane do lokalizacji naturalnie występujących w komórkach lub wprowadzonych do nich przeciwciał łączących się ze strukturami komórkowymi

Przykładami enzymów , które mogą być wykryte histochemicznie, są:

fosfatazy
dehydrogenazy
peroksydazy