T.28: Retrovirus

Ciclo replicativo VIH

1. El virus establece contacto mediante el receptor CD4 con un linfocito T mediante la Gp120.

2. Se fusionan las membranas y el virus se sumerge en el citoplasma. Tras ello se produce la decapsidación, quedando libre las dos cadenas de ARN en el citoplasma, donde una serie de enzimas actúan sobre:

   1. Retrotranscriptasa, que genera una doble cadena de ADN que ingresa en el

   2. Integrasa, que integra esta doble cadena en el genoma celular.

3. Se producen entonces fenómenos de transcripción y traducción, generando una gran poliproteína vírica, a la vez que se sintetizan copias de ARN del virus.

   1. Proteasa, que fragmenta esta gran poliproteína

5. Se ensambla el virus y se libera mediante gemación al espacio extracelular.

Evolución de los marcadores en la infección por VIH

La evolución de los marcadores en la infección por VIH sigue un orden cronológico característico.

Cronológicamente:

1. ARN VIH → ~10 días. Coincide con el aumento de la carga viral durante la primoinfección

2. Ag p24 → pocos días después (inmunoensayos de 4ª generación) + durante la fase inicial de la infección, desaparece en la fase de replicación crónica y puede volver a detectarse en la fase de SIDA

3. Anticuerpos anti-VIH (Ac frente a proteínas Env, Pol y Gag)→ 2-3sem tras infección. Positivos durante la infección

El ADN proviral permanece positivo desde el inicio de la infección, ya que el ADN viral queda integrado en el genoma de las células infectadas.

Durante la primoinfección existe una elevada carga viral y descenso brusco de LT-CD4.

En la fase crónica la carga viral disminuye y los LT-CD4 se mantienen relativamente estables.

En la fase SIDA vuelve a aumentar la carga viral y disminuyen intensamente los LT-CD4.

Dx del neonato con madre VIH +

• Detección de Ac o de Ag-Ac.

• El resultado positivo se confirma con un Western-Blot. El patrón debe ser idéntico al de su madre. Si al repetir el WB en meses sucesivos las bandas desaparecen progresivamente, el bebé no está infectado.

• Detección Del Antígeno P24: Confirma Infección.

• Detección de ADN proviral en los linfocitos T CD4 +: Confirma la infección.

Dx específico de la infección por VIH

El diagnóstico específico de la infección por VIH es siempre un diagnóstico de laboratorio, ya que las manifestaciones clínicas suelen ser inespecíficas o incluso ausentes.

El diagnóstico puede realizarse mediante:

1. Diagnóstico microbiológico DIRECTO:

• Detección del virus o de sus componentes:

  • ARN viral mediante PCR cuantitativa (carga viral plasmática).

  • Antígeno p24.

  • ADN proviral mediante PCR cualitativa.

2. Diagnóstico microbiológico INDIRECTO:

• Detección de anticuerpos frente al VIH-1 y VIH-2. Actualmente, el método de elección inicial es el inmunoensayo de cuarta generación, que detecta simultáneamente:

  • Antígeno p24 del VIH-1.

  • Anticuerpos frente a VIH-1 y VIH-2.

• Si el cribado es positivo, debe confirmarse mediante pruebas de mayor especificidad (permiten además diferenciar infección por VIH-1 y VIH-2)

  • Western Blot (WB).

  • Inmunoanálisis en línea (LIA), que es el método preferente.

  • Inmunocromatografía.

  • En casos dudosos o de infección aguda se determina la carga viral plasmática mediante PCR cuantitativa para ARN VIH.

El algoritmo diagnóstico recomendado es:

1. ELISA/inmunoensayo de 4ª generación.

2. Si es positivo → repetir por duplicado.

3. Diferenciación VIH-1/VIH-2.

4. Si el resultado es indeterminado → determinación de ARN VIH-1.

Las muestras más utilizadas son sangre, suero y plasma.

VIH pruebas rápidas, que se detecta, cuales son y utilidad

Dan una lectura rápida visual y subjetiva en menos de 30 minutos, utilizando muestras como fluido oral, punción digital, suero y plasma.

Se realiza un inmunocromatografía de flujo lateral en la que se detecta anticuerpos frente VH-1 y VH-2 así como para gp24 del VIH-1.

Se obtienen preliminares con menor sensibilidad y especificidad que el inmunoensayo, pero útiles para aquellos sitios donde no se puede acceder de manera eficaz a un laboratorio.

VIH importancia de la carga viral

La determinación de la carga viral del VIH en las diferentes muestras mediante técnicas de PCR cuantitativa, que detecta ARN del virus, nos son útiles para la toma de deciciones terapéuticas, monitorización del tratamiento antirretroviral (ya que este puede fallar por producción de resistencias a ATB), asÌ como también para el diagnóstico precoz de un paciente, diagnóstico de infección en recién nacidos de riesgo por madres VIH+, o aquellas pruebas aerologías indeterminados. Es una prueba directa VIH

VIH inmunoensayo de 4ª generación

Es actualmente la técnica de cribado de elección para el diagnóstico de la infección por VIH. Es una prueba de inmunoensayo que detecta simultáneamente:

• Anticuerpos frente a VIH-1 y VIH-2.

• Antígeno p24 del VIH-1.

Utiliza como reactivos péptidos recombinantes o sintéticos de VIH-1/VIH-2 y anticuerpos frente al Ag p24.

Su principal ventaja es la reducción del periodo ventana, que es aproximadamente de 13-15 días tras la infección, permitiendo un diagnóstico más precoz que las generaciones anteriores.

Es una técnica con elevada sensibilidad y muy coste-efectiva, ya que permite analizar gran cantidad de muestras de forma automatizada. Sin embargo, requiere equipos automatizados y personal experimentado.

En el algoritmo diagnóstico del VIH:

1. Se realiza inicialmente un inmunoensayo de 4ª generación.

2. Si el resultado es negativo, no se realizan más pruebas.

3. Si es positivo, debe repetirse y confirmarse mediante pruebas de mayor especificidad (LIA, Western Blot o inmunocromatografía).

La muestra utilizada suele ser sangre, suero o plasma.

VIH: enzimas, cómo se adhiere, diagnóstico para un cirujano que se ha pinchadoVIH: enzimas, cómo se adhiere, diagnóstico para un cirujano que se ha pinchado

• Enzimas: transcriptasa inversa, integrasa y proteasa

• Adhesión a las células: Las glucoproteínas gp41 y gp120 de la envuelta se unen al receptor CD4 de la célula. Esto provoca un cambio conformacional a gp120 que le permite unirse a su correceptor (CCR5/CXCR4). Una vez unido al correceptor la gp41 cambia su estructura y expone una región del virus que produce una fusión activa con la membrana citoplasmática de la célula diana.

• Exposición accidental: Detección de Ag y Ac (EIA 4a generación) y carga viral: ARN-VIH (PCR):

  • Al momento de pincharse

  • A los 15 días si es negativo la primera vez

¿Qué pruebas diagnósticas se piden para un paciente ADVP con sospecha de VIH? ¿Y en un neonato?

1. Paciente ADVP con sospecha de VIH:

• Se deben detectar los Ac y, si se puede Ag-Ac.

• Si el resultado es positivo, debe confirmarse con Western-Blot. Hay que detectar Ag p24, que confirma la primoinfección.

• En caso de ser resultados discordantes, se recurre a la detección del ADN proviral para alcanzar el diagnóstico definitivo.

2. Neonato con sospecha de VIH:

• Detección de Ac o de Ag-Ac.

• El resultado positivo se confirma con un Western-Blot. El patrón debe ser idéntico al de su madre. Si al repetir el WB en meses sucesivos las bandas desaparecen progresivamente, el bebé no está infectado.

• Detección Del Antígeno P24: Confirma Infección.

• Detección de ADN proviral en los linfocitos T CD4 +: Confirma la infección.

Aplicación de las pruebas para el diagnóstico de VIH

Las pruebas diagnósticas del VIH se aplican según la situación clínica.

1. Diagnóstico de infección por VIH:

• Se sigue el algoritmo diagnóstico:

  • Inmunoensayo de 4ª generación (Ag p24 + Ac VIH-1/VIH-2).

  • Confirmación mediante LIA, Western Blot o inmunocromatografía.

  • Si el resultado es indeterminado → determinación de ARN VIH.

2. Sospecha de primoinfección, exposición accidental laboral, violación o práctica sexual de riesgo:

• Inmunoensayo de 4ª generación.

• Determinación de ARN-VIH (carga viral), ya que se positiviza precozmente.

3. Recién nacidos de madre VIH+:

• Determinación de ARN-VIH, porque los anticuerpos maternos pueden persistir y hacer positivos los Ac sin infección real.

4. Control y monitorización del tratamiento antirretroviral:

• Determinación de carga viral plasmática mediante PCR cuantitativa para ARN VIH.

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) presenta una dinámica viral característica, en la que la carga vírica:

a. Tras el periodo ventana se hace detectable y permanece estable el resto de la enfermedad

b. Aumenta, haciéndose máxima durante la infección aguda o primoinfección y se mantiene alta durante el resto de las fases

c. Tras el periodo ventana se hace detectable, pero se mantiene baja hasta la última fase (SIDA) donde se hace máxima

d. Va aumentado progresivamente durante el desarrollo de la enfermedad

e. Aumenta, haciéndose máxima durante la infección aguda o primoinfección para luego bajar en el periodo de latencia prolongada (replicación crónica), volviendo a aumentar nuevamente en la última fase (SIDA)

e. Aumenta, haciéndose máxima durante la infección aguda o primoinfección para luego bajar en el periodo de latencia prolongada (replicación crónica), volviendo a aumentar nuevamente en la última fase (SIDA)

Vías de transmisión del VIH

1. Vía parenteral:

• Contacto con sangre y hemoderivados.

• Transfusiones.

• Compartir agujas en ADVP.

• Tatuajes y piercings con material contaminado.

2. Vía sexual:

• A través de semen y secreciones vaginales.

• Es la vía de transmisión más frecuente.

3. Vía materno-fetal (El riesgo de transmisión materno-fetal puede reducirse hasta aproximadamente el 1% con tratamiento antirretroviral en madre e hijo)

• Durante el embarazo.

• En el parto.

• A través de la leche materna.

Responde sí o no en base a los métodos diagnósticos de VIH en base a los distintos supuestos: sanitario que se pincha con una aguja, paciente con sospecha de síndrome retroviral agudo, pareja VIH+, recién nacido de madre VIH+

1. Petición de anticuerpos (Ag-Ac),

2. Petición del Ag p24

3. ADN proviral

4. Carga viral despistaje en trabajadora