CHAPTER 5 — THE GENERATION OF LYMPHOCYTE ANTIGEN RECEPTORS

Hoe kunnen we ervoor zorgen dat elke T- en B-cel die gegenereerd worden over andere receptor beschikt die ander AG kan herkennen?

Genherschikking

Hoe gebeurt genherschikking?

De lichte keten bestaat uit een V (variabel) en een J (joining) gensegment terwijl de zware keten uit een D (Diversity), J en V gensegment bestaat.

Wat is de functie van het 'Leader peptide' L?

Het dirigeert het eiwit naar de secretorische pathway en wordt na de translatie geklieft

Wanneer worden de disulfide bruggen gevormd?

Na translatie?

Welke vereisten zijn er in de Ig genherschikking?

Vb. een V gensegment moet herschikken met een (D of) J gensegment, nooit met een andere V gensegment!

Enkel recombinatie tussen gensegmenten van hetzelfde chromosoom.

Wat is RSS of Recombination signal sequence?

Bestaat uit een heptameer, spacer en een nonameer.

Heptameer is een geconserveerde sequentie van 7 nucleotiden, een spacer is een niet-geconserveerde sequentie van ofwel 12 of 23 nucleotiden lang (zodat hepta-en nonameer altijd aan dezelfde zijde van de DNA helix liggen) en de nonameer is een geconserveerde sequentie van 9 nucleotiden lang.

Wat betekent de 12/23 regel?

Een gensegment dat geflankeerd is door een RSS met een 12bp spacer kan alleen recombineren met een gensegment met een RSS met een 23bp spacer.

Wat als 2 gensegmenten dezelfde oriëntatie hebben (dus elk bv. 23bp spacer)

Die worden verknipt waardoor je een signal joint krijgt

Wat is een signal joint?

Circulair deel DNA die wordt verwijderd van het genoom

Voor wat staat RAG?

Recombination-activating gene

Welke RAGs komen voor?

RAG-1 en RAG-2 komen voor in de B-en T-lymfocyten

Wanneer worden RAG-1 en RAG-2 geëxpresseerd?

Ze worden geëxpresseerd tijdens de differentiatie van B-en T-lymfocyten

Wat is de functie van die RAG-1 en RAG-2 eiwitten?

Het zijn eiwitten die samen zullen binden aan RSS fragmenten en volgens de samengebrachte DNA fragmenten gaan verknippen door vorming haarspeld loop. Ze zijn dus beide essentiëel voor genherschikking.

Wat als RAG-1 of RAG-2 deficiënt zijn?

Leidt tot een volledige blok in T-en B lymfocyten ontwikkeling.

Hoe onstaan P-nucleotiden?

Doordat het RAG-1 en RAG-2 eiwit de gensegmenten wil bij elkaar brengen ontstaan er een haarspeld loop op een willekeurige plaats waardoor P-nucleotiden 'palindromic' nucleotiden worden gevormd.

Wat betekent TdT (terminal deoxynucleotidyl transferase)

Hierdoor worden N-nucleotiden op een willekeurige manier toegevoegd.

Wat komt er voor bij 2/3 herschikkingen?

Vermits het aantal P- en N-nucleotiden willekeurig is kan er een stopcodon onstaan = niet-productieve herschikking waardoor er een niet-functioneel eiwit ontstaat.

Hoe ontstaat de grote variabiliteit van de CDR3?

Door het willekeurig toevoegen van P-en N-nucleotiden

Waar zijn de alfa-bèta gensegmenten gelokaliseerd?

Ze zijn gelokaliseerd in 2 clusters of genetische loci

- De alfa locus (chromosoom 14) : verschillende V en J gensegmenten, en 1 C gensegment.

- De bèta locus (chromosoom 7) : verschillende V en J gensegmenten, en 2 D en 2 C gensegmenten.

Welke overeenkomsten zijn er tussen de herschikking van de TCR en Ig?

- hepta - en nonameer RSS

- 12/23 regel

- P en N-nucleotiden

- RAG-1 en RAG-2

Welke verschillen zijn er tussen TCR en IG?

Voor de zware keten van Ig zijn er verschillende C domeinen die het isotype en ook de effectorfunctie van Ig bepalen & bij de TCR zijn de C domeinen veel eenvoudiger : 1 C domein voor alfa keten en 2 sterk homologe C-domeinen voor de beta-keten.

Hoeveel antilichaam isotypen zijn er?

5 isotypen

Op welke manier verschillen de isotypen met elkaar?

Afhankelijk van keuze van het C segment tijdens genherschikking en zo verschillen ze in de N-linked suikergroepen en in het aantal disulfidebruggen & hun locatie

Wat is de functie van het V eiwitdomein?

Antigeenbinding

Wat is de functie van het C eiwitdomein?

Het C eiwitdomein bepaalt isotype en dat isotype bepaalt de effector functie van het antilichaam molecule.

Welke effectorfuncties heeft C domein?

Interactie Fc en complement : activering complement cascade

Interactie Fc met Fc receptor : activering fagocyten, mastcellen & basofielen en NK cellen

Fc fragment zorgt voor specifieke lokalisatie van antilichaam :

IgG : transplacentaire transfer van zwangere moeder naar foetus

IgA: mucus, traanvocht en moedermelk.

Welke isotypes worden geproduceerd bij immature B cellen?

Vooral IgM productie

Welke isotypes worden geproduceerd bij mature B cellen?

Zowel IgM als IgD op de celmembraan

Welke isotypen kunnen isomeren vormen?

IgM kan een pentameer vormen & IgA een dimeer.

Welk isomeer komt er voor op de naïve B cellen?

Tetrameer dus 2 heavy en 2 light chains/ketens.