1 mikroskopijos tema

Pagrindinių mikrobiologinės diagnostikos mikroskopijos metodų, dažymo būdų ir jų principų rinkinys, apimantis šviesinę, fluorescencinę ir elektroninę mikroskopiją.

Mikroskopija

Mikroskopo naudojimas plika akimi nematomų objektų padidinimui ir jų charakteristikų įvertinimui; pagrindinis būdas mikroorganizmams aptikti tiesiogiai mėginiuose.

Skiriamoji geba

Mažiausias atstumas tarp dviejų taškų, kai jie dar matomi kaip du taškai, nesusilieję į vieną; reikšmingiausias mikroskopo rodiklis.

Šviesinio mikroskopo ribos

Naudojant net idealų šviesinį mikroskopą, neįmanoma pamatyti mažesnių nei $0,2\,\mu m$ objektų.

Mikroorganizmų kiekio slenkstis

Bakterijų galima rasti mikropreparate, jei tiriamojoje medžiagoje jų yra ne mažiau kaip $10^5/ml$.

Romanovskio-Gimzos dažymo būdas

Naudojamas ląstelės branduolio struktūrai tirti, taip pat pirmuonių bei kai kurių bakterijų (riketsijų, spirochetų) morfologijai.

Burio dažymo būdas

Metodas bakterijų kapsulių išryškinimui, kai tušu nudažomas fonas, o kapsulės lieka bespalvės.

Auješkio dažymo būdas

Specialus dažymo metodas, naudojamas bakterijų sporoms stebėti.

Neiserio dažymo būdas

Metodas, kuriuo bakterijų voliutino intarpai (gūdeliai) nudažomi mėlynai, o pačios bakterijos – geltonai.

Fiksavimas metanoliu

Naudojamas 95 proc. metanolis (1 min.); padeda išsaugoti bakterijų ir ląstelių (ypač kraujo mėginiuose) morfologiją.

Gramo dažymo principas

Paremtas skirtinga sienelių struktūra: gram(+) turi storą peptidoglikaną ir teicho rūgštis, gram(-) turi ploną peptidoglikaną ir išorinį lipidų dvisluoksnį.

Gramo dažymo etapai

1. Kristalinis violetas; 2. Liugolis (surišėjas); 3. Blukinimas alkoholiu; 4. Fuksinas arba safraninas (baigiamasis dažas).

Bakterijos, nesidažančios Gramo būdu

Chlamidijos (viduląstelinės), Mycoplasma spp. ir Ureaplasma spp. (neturi sienelės), Mycobacterium spp. (daug lipidų) bei spirochetos.

Cylio-Nilseno dažymo būdas

Naudojamas rūgštims atsparioms bakterijoms (pvz., Mycobacterium tuberculosis) dažyti, naudojant karbolio rūgšties fuksiną ir kaitinimą.

Kinjono dažymo būdas

Cylio-Nilseno modifikacija („šaltasis“ būdas), kuriai nereikia kaitinimo dėl didesnės fenolio koncentracijos dažuose.

Mikolinės rūgštys

Ilgos riebiųjų rūgščių grandinės rūgštims atsparių bakterijų sienelėje, kurios silpnai adsorbuoja paprastus dažus.

„Suspausto“ lašo preparatas

Metodas, naudojamas mikroorganizmų judrumui tirti po dengiamuoju stikleliu.

Fazių kontrasto mikroskopija

Metodas, padidinantis gyvų nedažytų mikroorganizmų (pvz., grybų) kontrastą nenaudojant tepinėlių dažymo.

Tamsaus lauko mikroskopija

Naudojamas specialus kondensorius, nukreipiantis šviesą įstrižai; taikomas sifilio sukėlėjai Treponema pallidum aptikti.

Fluorescencija

Reiškinys, kai fluorochromai sugeria ultravioletinę šviesą ir išskiria energiją matomos šviesos pavidalu.

Oranžinis akridinas

Fluorescencinis dažas, besijungiantis su nukleorūgštimis; naudojamas kraujo mėginiams ar sienelės neturinčioms bakterijoms.

Auraminas – rodaminas

Fluorescuojantys dažai, turintys afinitetą mikobakterijų sienelėse esančioms mikolinėms rūgštims (švyti geltonai/oranžiniai).

Imunofluorescencija

Specifinis metodas, kurio metu fluorescenciniai dažai (konjugatai) yra sujungti su specifiniais antikūnais prieš tam tikrus antigenus.

Elektroninė mikroskopija

Naudoja pagreitintą elektronų srautą vietoje šviesos; leidžia padidinti objektus iki $100\,000$ kartų.

TEM vs. SEM

TEM (transmisinė) vizualizuoja vidines struktūras peršviečiant objektą; SEM (skenuojanti) nuskaito paviršių ir pateikia trimačius vaizdus.