DNA modification

Chemicaliën die worden gebruikt bij isolatie protocollen

SDS

zorgt voor het denatureren van eiwitten door de binden aan de hydrofobe kernen

Guanidine hydrochloride/ iso- thiocyanate

zorgt voor het denatureren van eiwitten door de binden aan de polaire gebieden

Phenol

zorgt voor het denatureren van eiwitten en het verwijderen van fosfolipiden

DTT

zorgt voor het kapot maken van de disulfide bruggen

EDTA

chelaat vormer die bind aan calcium en remt de enzym activiteit

Proteinase K

katalyseert de hydrolyse van de peptide bindingen, bij 56 graden

RNAse A

katalyseert de splitsing P- O 5' bindingen in het RNA

Sodium cloride [natriumchloride]

neerslaan van celresten en neutraliseert de DNA backbone

Sodium acetate [natriumacetaat]

verwijdert de hydratatieschil rond de fosfaatgroepen van het geneutraliseerde DNA

Chloroform

zorgt voor de fase scheiding en het oplossen van niet polaire eiwitten, vetten en celresten

Isoamylalcohol

stabiliseert de interfase voor een goede DNA extractie en voorkomt de vorming van fosgeen

Ethanol en isopropanol

verwijdert de hydratatieschil rond fosfaatgroep van geneutraliseerd DNA en zorgt voor het neerslaan van DNA

NaOH

zorgt voor het kapot gaan van de celwand en voor het denatureren van DNA en de hydrolyse van RNA

Kac

slaat het gedenatureerde eiwit samen met het gDNA en SDS neer en neutraliseert het lysaat

Phenol pH 7,4

fosfaatgroepen op het DNA worden geneutraliseerd met H+ en het DNA wordt ongeladen. Dit verplaatst zich naar de organische fase. RNA pKA meer geladen.

Guanidine thiocyanate

verstoren de associatie van nucleïnezuren met water en ontleedt eiwitten door te binden aan de polaire gebieden van het eiwit.