Chapitre 3 : Les principales méthodes de dosage

Quelles sont les principales techniques utilisées en laboratoire de chimie clinique ?

• Spectrophotométrie (UV et visible)

• Méthodes électrochimiques :

  • Ampérométrie

  • Conductimétrie

  • Ces méthodes sont de moins en moins utilisées et appelées à disparaître

• Méthodes immunologiques

• Techniques séparatives

• LC-MS/MS : spectrométrie de masse couplée à une chromatographie en phase liquide

• Enzymologie

• Point of care / Self-patient testing (réalisé par le patient ou le personnel - test de grossese, autotest covid)

I. Dosage par spectrophotométrie

I. Dosage par spectrophotométrie

Quel est le principe général du dosage par spectrophotométrie

• La technique repose sur l’absorption de la lumière (visible ou UV) par une substance

• Cette absorption permet de quantifier la substance présente dans l’échantillon

Quel est l’exemple donné d’utilisation de la spectrophotométrie en chimie clinique ?

• Le dosage de l’albumine à pH 4,1

• À ce pH, l’albumine devient un cation

• Elle se lie au vert de bromocrésol (BCG)

• Cette liaison forme un complexe albumine-BCG

• Ce complexe absorbe la lumière dans les bleu-vert

Comment la concentration en albumine est-elle estimée par spectrophotométrie ?

• Plus il y a d’albumine → plus il y a de complexes albumine-BCG

• Plus le complexe est présent → plus l’intensité de la couleur bleu-vert est élevée

• La concentration en albumine est proportionnelle à l’intensité mesurée

Pourquoi la spectrophotométrie n’est-elle pas une méthode spécifique ?

• Parce que d’autres substances peuvent aussi se lier au BCG à pH 4,1

• Elles peuvent également générer une couleur dans les bleu-vert

• Cela peut entraîner une interférence avec le dosage de l’albumine

Pourquoi la spectrophotométrie est-elle malgré tout largement utilisée pour le dosage de l’albumine ?

• Peu coûteuse

• Simple à mettre en œuvre

• Accessible à tout laboratoire équipé d’un petit spectrophotomètre

• L’albumine est hautement concentrée dans le sérum (~40 g/L)

  • Donc une petite erreur due à d’autres constituants a peu d’impact

Quels types d’appareils sont généralement équipés pour réaliser la spectrophotométrie ?

• Les gros analyseurs automatisés de chimie

• Beaucoup d’analyses de routine y sont réalisées selon cette technique

Quel exemple illustre l'utilisation des UV en spectrophotométrie pour doser un ion inorganique ?

• Le phosphate est dosé avec du molybdate d’ammonium

• En présence d’acide sulfurique, formation de phosphomolybdate d’ammonium

• Ce complexe absorbe dans l’ultraviolet

Quels sont les avantages et limites des dosages par spectrophotométrie ?

• Avantages :

  • Faciles à mettre en œuvre

  • Peu coûteux

  • Tout terrain

  • Rapides

  • Très robustes

• Inconvénient :

  • Manque de spécificité

II. Dosage des marqueurs biologiques par l’immunoanalyse

II. Dosage des marqueurs biologiques par l’immunoanalyse

La courbe de précipitation d’Heidelberg

La courbe de précipitation d’Heidelberg

Quelle est la base des dosages par immunoanalyse ?

• L’interaction spécifique entre un anticorps et un antigène

• Cette interaction permet de mesurer des marqueurs biologiques

Qu’est-ce que la courbe de précipitation d’Heidelberg ?

• Une courbe illustrant la formation et la dynamique des complexes antigène-anticorps

• Se divise en trois zones selon la concentration en antigène

Qu’observe-t-on dans la zone I de la courbe de Heidelberg ?

• Formation de complexes antigène-anticorps

• Apparition d’un précipité ou trouble

• Ces complexes diffusent ou absorbent un rayon lumineux ou laser

• L’absorbance est proportionnelle à la concentration d’antigène

Qu’observe-t-on dans la zone II de la courbe de Heidelberg ?

• Équivalence entre les concentrations en antigène et anticorps

• Formation d’un réseau gélifié et bien structuré

Qu’observe-t-on dans la zone III de la courbe de Heidelberg ?

• Excès d’antigène

• Dissociation des complexes antigène-anticorps

• Diminution de l’absorbance

• Solution devient claire

Quelles zones de la courbe de Heidelberg sont utilisées pour les méthodes immunométriques ?

Zone I : utilisée pour la turbidimétrie et la néphélométrie

Quel est le principe de l’immunoturbidimétrie ?

• On mesure la lumière transmise à travers une solution trouble

• Exemple : dosage de la β-2-microglobuline dans l’urine

• Étapes :

  • On établit un blanc : urine limpide, 100 % de lumière transmise

  • On ajoute un anticorps anti-β-2-microglobuline fixé à des particules de latex (pour augmenter leur taille)

  • Formation de complexes antigène-anticorps → apparition d’un trouble

  • La diminution de la lumière transmise est proportionnelle à la concentration en β-2-microglobuline

  • Mesure réalisée avec un spectrophotomètre

Quel est le principe de l’immunonéphélométrie ?

• On mesure la lumière diffusée par les complexes antigène-anticorps

• Un laser ou faisceau lumineux traverse la solution

• Le rayon est diffracté par les complexes

• Un photomultiplicateur placé en angle mesure la lumière diffusée

• Plus il y a d’antigène → plus le trouble est important → plus la lumière est diffractée

• L’intensité de la lumière diffusée est proportionnelle à la concentration en β-2-microglobuline

Quelle est la différence principale entre la turbidimétrie et la néphélométrie ?

• Turbidimétrie :

  • Moins sensible

  • Moins coûteuse

  • Utilisable avec un simple spectrophotomètre

• Néphélométrie :

  • Plus sensible

  • Plus onéreuse

  • Nécessite un appareillage spécifique pour mesurer la lumière diffusée

Sur quels types d'appareils peut-on réaliser la turbidimétrie et la néphélométrie ?

• Turbidimétrie :

  • Réalisable sur tous les automates de chimie équipés d’un spectrophotomètre

• Néphélométrie :

  • Réalisable uniquement sur des néphélomètres dédiés

Quelles précautions doit-on prendre lors de l'utilisation de ces techniques ?

• Attention à la présence de particules en suspension :

  • Poussières

  • Macroglobulines

  • Agrégats non spécifiques

• Ces éléments peuvent fausser la mesure de la lumière transmise ou diffusée

• Nécessité d’opérer dans des solutions diluées

• Utilisation de l’ultracentrifugation

Effet crochet

Effet crochet

Qu’est-ce que l’effet crochet (hook effect) en immunoanalyse ? (Pas vu)

• C’est un piège analytique observé dans la 3ᵉ zone de la courbe d’Heidelberger

• Il se produit lorsqu’il y a un excès très important d’antigène dans l’échantillon

• Cet excès détruit les complexes antigène-anticorps au lieu d’en former davantage

Que se passe-t-il lorsque l’effet crochet est présent ?

• Le trouble diminue paradoxalement malgré une concentration d’antigène très élevée

• Le signal mesuré est plus faible

• Résultat : un patient très pathologique peut avoir un résultat normal voire faussement bas

Comment les automates modernes détectent-ils l’effet crochet ?

• Ils mesurent la cinétique d’apparition du trouble

• Si la cinétique est trop rapide, cela indique une concentration anormalement élevée d’antigène

• L’automate procède alors à une dilution automatique de l’échantillon

• Cela permet de confirmer ou éliminer un effet crochet

Dans quels milieux peut-on utiliser la turbidimétrie et la néphélométrie pour doser des protéines ?

• Plasma

• Urine

• Liquide céphalo-rachidien (LCR)

• Et autres liquides biologiques

Quels types de protéines peut-on doser avec la turbidimétrie et la néphélométrie ?

• Protéines présentes à des concentrations de l’ordre du mg/L

• Types de protéines :

  • Marqueurs de réponse inflammatoire :

    • CRP

    • Haptoglobine

  • Marqueurs du statut nutritionnel :

    • Albumine

    • Pré-albumine

  • Marqueurs du statut martial :

    • Transferrine

  • Marqueurs de l’immunité humorale :

    • Immunoglobulines

  • Marqueurs de la fonction rénale (glomérulaire ou tubulaire) :

    • Cystatine C

    • β-2-microglobuline

III. Dosage d’anticorps ou d’antigènes marqués par immuno-analyse

III. Dosage d’anticorps ou d’antigènes marqués par immuno-analyse

Quels sont les deux grands types de dosages par immunoanalyse marquée ?

• Mode compétitif

• Mode non-compétitif (aussi appelé dosage sandwich)

Mode compétitif

Mode compétitif

Quel est le principe général du mode compétitif ?

• Un anticorps de capture est fixé sur un support solide (cupule, bille, tube, etc.)

• On ajoute :

  • Le sérum du patient contenant l’antigène à doser (ex : œstradiol)

  • Une forme marquée de cet antigène (avec un marqueur : enzyme, fluorophore, iode radioactif…)

Quel est l'exemple classique illustrant un dosage compétitif ?

• Dosage de l’œstradiol dans le sérum

• Anticorps anti-œstradiol fixé sur un support

• Compétition entre l’œstradiol du patient et l’œstradiol marqué (ex : iode-125)

• Si le marqueur est l’iode 125, la méthode est appelée RIA (Radio Immuno Assay)

Comment interprète-t-on le résultat d’un dosage compétitif ?

• Après incubation pour équilibrer les deux oestradiols, lavage pour éliminer les éléments non fixés

• On mesure le signal du marqueur (ex : radioactivité)

• Relation inverse :

  • Plus le signal est élevé, moins il y a d’antigène dans l’échantillon

  • Plus il y a d’antigène dans l’échantillon, plus il prend la place du marqueur → signal diminué

Quelle forme a la courbe de calibration en dosage compétitif ?

Courbe décroissante

• Concentration faible → signal élevé

• Concentration forte → signal faible

Mode non compétitif

Mode non compétitif

Quel est le principe du dosage non-compétitif (sandwich) ?

• Utilise deux anticorps spécifiques dirigés contre deux épitopes différents de la même molécule

• Le premier anticorps est fixé au support solide (anticorps de capture)

• Le second anticorps est marqué (enzyme, fluorescence, iode radioactif…)

Quelle est la procédure du dosage sandwich (non-compétitif) ?

• Incubation du sérum du patient avec le support solide portant l’anticorps

• La molécule à doser (ex : TSH) se fixe sur le premier anticorps

• Ajout du second anticorps marqué, dirigé contre un autre épitope de la molécule

• Incubation puis lavage

• Mesure du signal du marqueur

Quelle est la relation entre le signal mesuré et la concentration de l’analyte en dosage sandwich ?

Le signal est directement proportionnel à la concentration de l’analyte dans l’échantillon

Pourquoi le mode non-compétitif est-il plus spécifique que le mode compétitif ?

• Parce qu’il nécessite la reconnaissance de deux épitopes différents sur la molécule cible

• Cela donne deux confirmations indépendantes de la présence de l’analyte

Quel est le principe d’un test sérologique ?

• On fait l’inverse d’un dosage classique

• On fixe des antigènes sur un support solide

• On dose ensuite les anticorps circulants présents dans le sérum du patient

Donne un exemple de test sérologique.

• Test COVID-19 sérologique

• On fixe des particules virales du coronavirus sur un support

• On incube avec le sérum du patient

• Si le patient a été infecté ou vacciné → il a des anticorps IgG ou IgM

• Ces anticorps se fixent aux antigènes

• Un anticorps secondaire marqué (anti-IgG ou anti-IgM) est ajouté pour détecter le complexe

Quelle est la différence entre anticorps monoclonaux et polyclonaux ?

• Anticorps monoclonal :

  • Ne reconnaît qu’un seul épitope

• Anticorps polyclonal :

  • Peut reconnaître plusieurs épitopes

  • Obtenu en immunisant un animal de grande taille

Dans quel cas peut-on utiliser un dosage en mode non-compétitif ?

• Il faut que l’antigène ait au moins deux épitopes distincts

• Ces épitopes doivent être suffisamment éloignés

• Exemples d’antigènes adaptés :

  • TSH

  • HCG

  • Parathormone

  • Peptides

Dans quel cas faut-il utiliser un mode compétitif ?

• Lorsque la molécule est petite et ne possède qu’un seul épitope

• Exemples :

  • Stéroïdes

  • Certains médicaments

IV. Dosage par immunoassay enzymatique (EIA : Enzyme Immunoessay)

IV. Dosage par immunoassay enzymatique (EIA : Enzyme Immunoessay)

Technique ELISA

Technique ELISA

Qu’est-ce que la méthode EIA (Enzyme Immunoassay) ?

• Technique de dosage immunologique utilisant un traceur enzymatique

• La version la plus connue est l’ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

Quel est le principe du dosage ELISA ?

• Une phase solide porte les anticorps (ou antigènes)

• On ajoute le sérum contenant l’antigène (ou l’anticorps) à doser

• Un 2ᵉ anticorps marqué est ajouté pour générer un signal coloré

• Interprétation :

  • En mode non-compétitif : plus de couleur → plus d’analyte

  • En mode compétitif : plus de couleur → moins d’analyte

Quels sont les avantages de la méthode ELISA ?

• Très sensible : permet de détecter de faibles concentrations

• Possibilité d’utiliser divers traceurs :

  • Enzymatiques

  • Fluorescents

  • Luminescents

• Méthode tout terrain, utilisable dans tous les laboratoires

• Alternative au RIA (Radio Immuno Assay), qui :

  • Utilise de l’iode radioactif

  • A une durée de vie limitée (~120 jours) à cause de la demi-vie limité de l’iode

  • Produit des déchets radioactifs

Quels sont les inconvénients de la méthode ELISA ?

• Très sensible aux conditions opératoires :

  • pH, température, volume…

• Nécessite parfois des volumes importants (ex : 100 µL)

• Risque d’erreur lié au pipetage :

  • Habilité de l’opérateur

  • Qualité de la pipette

• Semi-automatisable :

  • Certains automates peuvent pipeter, incuber et lire l’absorbance

• Limitation importante :

  • Un seul analyte par plaque

  • Exemple :

    • Dosage des IgG contre la toxoplasmose nécessite un kit spécifique

    • Dosage simultané des IgM nécessite un deuxième kit distinct

Révélation de l’activité enzymatique

Révélation de l’activité enzymatique

Quels sont les trois types de techniques de révélation de l’activité enzymatique ?

• Colorimétrie

• Fluorimétrie

• Chimiluminescence

Quel est le principe de la révélation enzymatique par colorimétrie ?

• On utilise un conjugué enzymatique (ex : phosphatase alcaline)

• On ajoute le substrat de l’enzyme

• L’enzyme agit sur le substrat → formation d’un produit coloré

• La coloration produite est mesurée → reflète l’activité enzymatique

Quel est le principe de la fluorimétrie ?

• Le marqueur utilisé est fluorescent

• Le fluorophore est excité plusieurs fois rapidement

• Méthode plus sensible que la colorimétrie

Quel est le principe de la chimiluminescence ?

• Utilisée uniquement dans les gros automates de chimie

• Repose sur la génération d’un flash lumineux

• Ce flash est dû à l’oxydation d’un ester d’acridinium

• Technique extrêmement sensible, encore plus que la fluorimétrie

Technique Multiplex

Technique Multiplex

Pourquoi utilise-t-on des techniques multiplex ?

• Pour contourner la limite de l’ELISA (1 analyte/plaque)

• Permet de doser plusieurs molécules proches en un seul test

• Avec un volume très faible de sérum

Quel est le principe de la technique multiplex ?

• Utilise des billes magnétiques (jusqu’à 50) revêtues de :

  • Une couleur spécifique

  • Un anticorps unique

• On incube les billes avec le sérum du patient

• Chaque bille capture son antigène d’intérêt

• Un aimant est utilisé pour les regrouper → on lave

• Un 2ᵉ anticorps marqué est ajouté

• Une caméra identifie les billes et mesure l’intensité du signal pour chaque complexe

Quels sont les avantages et limites de la technique multiplex ?

• Avantages :

  • Permet de doser plusieurs molécules à la fois

  • Très petit volume de sérum nécessaire

• Limites :

  • Ne peut pas être appliquée à tous les types d’analytes

  • Réservée à des substances proches (ex : interleukines)

V. Microarrays

V. Microarrays

Que sont les microarrays et dans quel domaine sont-ils utilisés ?

• Utilisés surtout pour le diagnostic des allergies

• Exemple : immunoCAP ISAC (test multiplex IgE spécifique)

Quel est le principe de fonctionnement des microarrays ?

• Petites puces sur lesquelles des allergènes sont fixés dans des puits

• Exemples d’allergènes : poil de chien, chat, cheval…

• On incube avec le sérum du patient

  • Si IgE spécifiques sont présents → ils se fixent sur l’allergène

• Ajout d’un anticorps anti-IgE marqué fluorescent

• Lecture sur un fluorimètre puits par puits

• Donne une quantification des IgE spécifiques

Quels sont les avantages des microarrays ?

• Possibilité de greffer plus d’une centaine d’allergènes

• Permet de mesurer de nombreux paramètres en un seul test

• Très faible volume de sérum nécessaire (ex : 20 µL)

  • Utile chez les enfants (quelques gouttes suffisent)

Quel est le principal inconvénient des microarrays ?

Coût élevé : environ 150 € par analyse

VI. Enzymologie

VI. Enzymologie

Quelles sont les deux grandes catégories d’enzymes circulantes dans le plasma ?

• Enzymes à rôle physiologique spécifique dans le plasma

• Enzymes présentes en transition, libérées par des cellules mortes

Quels sont des exemples d’enzymes qui ont un rôle spécifique dans le plasma ?

• Enzymes de la coagulation

• Rénine

• Lipoprotéine lipase

• Ces enzymes :

  • Activent, clivent, ou interviennent directement dans un processus physiologique

  • Sont actives dans le plasma

Qu’est-ce qu’une enzyme en transition dans le plasma ?

• Une enzyme libérée dans la circulation après la mort cellulaire

• Elle n’exerce pas de rôle actif dans le plasma

• Elle est destinée à être éliminée/dégradée

Quels sont des exemples d’enzymes en transition ?

• Lactate déshydrogénase (LDH)

• Transaminases : TGO (AST) et TGP (ALT)

• Créatine phosphokinase (CPK)

Pourquoi trouve-t-on des enzymes en transition dans la circulation lors d’un infarctus ?

• L’infarctus provoque une nécrose cellulaire

• Libération du contenu intracellulaire, y compris les enzymes

• Cela conduit à une élévation des concentrations plasmatiques d’enzymes comme LDH ou TGO

Ces enzymes sont-elles spécifiques d’un organe ?

• Non

• Elles sont présentes dans plusieurs tissus : cœur, muscles, foie, reins, etc.

• Une augmentation indique une nécrose ou lyse cellulaire, mais pas la localisation précise

Quelles sont les deux façons de doser une enzyme ?

• Par mesure d’activité enzymatique :

  • On ajoute le substrat spécifique à l’échantillon

  • On mesure la quantité de produit formé

• Par mesure de masse/concentration :

  • On utilise une méthode immunologique avec des anticorps dirigés contre l’enzyme

Donne un exemple d’enzyme pouvant être dosée par ces deux méthodes.

Rénine

Comment dose-t-on l’activité de la rénine ?

• On ajoute de l’angiotensinogène au sérum du patient

• On incube à 37°C pendant 1 heure

• La rénine transforme l’angiotensinogène en angiotensine I

• Après 1h, on dose la quantité d’angiotensine I produite

• Le résultat reflète l’activité de la rénine

Comment dose-t-on la masse de rénine ?

• On utilise une paire d’anticorps anti-rénine

• Ces anticorps capturent la rénine présente dans l’échantillon

• Le signal mesuré est proportionnel à sa concentration

Les résultats des deux méthodes de dosage (activité vs masse) sont-ils comparables ?

• Non

• La mesure d’activité peut être faussée par des inhibiteurs de la rénine

• Le dosage par masse peut manquer de sensibilité

• Les deux méthodes ne sont pas directement transposables

Quel est l’exemple classique de dosage enzymatique utilisant le NAD+/NADH ?

• Substrat utilisé : lactate

• Enzyme : LDH (présente dans le sérum du patient)

• Coenzyme : NAD+

• Réaction catalysée :

  • Lactate + NAD+ → Pyruvate + NADH + H⁺

• Le NADH formé absorbe à 340 nm, alors que le NAD+ absorbe à 260 nm

• On mesure l’apparition de NADH à 340 nm

• Plus il y a de NADH → plus il y a de LDH active dans le sérum

Dosage de substrat grâce à des enzymes

Dosage de substrat grâce à des enzymes

Peut-on utiliser des enzymes pour doser un substrat ?

• Oui, c’est une méthode très utilisée

• Exemple classique : dosage du glucose

Quelle est la technique de référence pour doser le glucose ?

• La technique à l’hexokinase

Quel est le principe de la méthode à l’hexokinase pour doser le glucose ?

• Réaction 1 :

  • Glucose + ATP → Glucose-6-phosphate (G-6-P) + ADP

  • Catalysée par l’hexokinase

• Attention : l’hexokinase n’est pas spécifique du glucose

  • Elle phosphoryle aussi d’autres sucres comme le fructose

Comment la méthode à l’hexokinase devient-elle spécifique au glucose ?

• En ajoutant une deuxième enzyme : glucose-6-phosphate déshydrogénase (G-6-PDH)

• Réaction 2 :

  • G-6-P + NADP⁺ → Gluconate-6-phosphate + NADPH + H⁺

• Ce que l’on mesure :

  • L’apparition du NADPH, qui absorbe dans l’UV

Pourquoi l’apparition du NADPH reflète-t-elle la concentration de glucose ?

• La quantité de NADPH formé est proportionnelle au G-6-P

• Le G-6-P est directement formé à partir du glucose dans la 1ʳᵉ réaction

• Donc : NADPH ↔ G-6-P ↔ Glucose

Quel est l’intérêt d’utiliser deux enzymes pour le dosage du glucose ?

• Cela permet de rendre la méthode spécifique du glucose malgré le manque de spécificité de l’hexokinase seule

• C’est une technique fiable et de référence en laboratoire

VII. Dosages par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse (LCMS/MS)

VII. Dosages par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse (LCMS/MS)

Qu’est-ce que la méthode LC-MS/MS ?

• LC-MS/MS = chromatographie liquide couplée à une spectrométrie de masse en tandem

• Technique très sensible et très spécifique

• Permet de doser précisément de nombreuses petites molécules biologiquement actives

Dans quels cas utilise-t-on la LC-MS/MS ?

Pour doser :

• Des médicaments

• Des hormones stéroïdiennes (ex : œstradiol, cortisol, aldostérone, progestérone…)

• Des hormones peptidiques

Pourquoi les hormones stéroïdiennes sont-elles difficiles à doser par des méthodes immunologiques ?

• Elles ont une structure très proche (même noyau de base issu du cholestérol)

• Elles diffèrent par de légères modifications chimiques :

  • Double liaison

  • Groupe OH

  • Ajout sur la chaîne latérale

• Leur activité biologique est très différente malgré ces petites variations

• Les anticorps utilisés en méthode compétitive peuvent présenter :

  • Un manque de spécificité

  • Des réactions croisées

Quels avantages présente la LC-MS/MS par rapport aux méthodes immunologiques ?

• Permet de doser individuellement chaque molécule stéroïdienne

• Possibilité de doser plusieurs molécules simultanément dans un seul run

• Meilleure précision et spécificité

Quel est le principal inconvénient de la spectrométrie de masse (LC-MS/MS) ?

• Coût très élevé : entre 300 000 et 400 000 €

• Nécessite :

  • Du personnel hautement qualifié

  • Une formation approfondie

• Demande des étapes préparatoires complexes :

  • Extraction liquide-liquide

  • Extraction solide-liquide

Pourquoi continue-t-on à utiliser d’autres méthodes malgré la supériorité de la LC-MS/MS ?

• Parce que d’autres automates permettent des dosages moins coûteux

• Ils sont plus simples à utiliser, même s’ils sont moins spécifiques

VIII. Standardisation des méthodes et traçabilités des dosages

VIII. Standardisation des méthodes et traçabilités des dosages

Quel est un des grands problèmes des techniques de dosage vues en chimie clinique ?

La standardisation et la traçabilité des dosages

Pourquoi la standardisation est-elle problématique en chimie clinique ?

• Parce que beaucoup de biomarqueurs n’ont pas de standards internationaux disponibles

• Chaque fabricant utilise son propre standard

• Résultat : entre deux fabricants, les résultats pour un même échantillon peuvent différer fortement

Donne un exemple illustrant le problème de standardisation entre fabricants.

Dosage de la parathormone :

• Avec un kit Roche → résultat : 100

• Avec un kit Abbott → résultat : 140

• Les valeurs de référence changent aussi → cacophonie dans les résultats

Quel serait l’idéal en termes de standardisation ?

Avoir pour chaque substance dosée :

• Un standard de référence/Un matériau de référence primaire

Quel exemple est donné comme matériau de référence primaire ?

• Le carbonate de calcium (CaCO₃) pour étalonner les dosages du calcium

• Pureté : 99,907 % ± 0,021 %

• La concentration de calcium est déterminée par des méthodes chimiques ou physiques

Que fait-on du CaCO₃ pour en faire un standard ?

• On le met en solution (puisqu’à l’état solide, il est inutilisable directement)

• On pèse une quantité précise pour la dissoudre → création d’un calibreur primaire en phase liquide