[Emotki] Mikrobiologia - Laby - Podłoża

Powieszę się pod sufitem...

W celu hodowli bakterii stosowane są podłoża (pożywki) mikrobiologiczne.

• Zawierają one składniki dobrane odpowiednio do hodowli danego gatunku bakterii.

Przygotowane podłoża muszą być wcześniej wyjałowione, by nie zawierały żadnych żywych mikroorganizmów.

Nazwij element pozwalający na hodowlę bakterii.

Opisz warunki, które muszą zostać spełnione przez jego użyciem oraz wyjaśnij czemu to ważne.

Inokulum

Podaj inną nazwę na mikroorganizm, który zasiedla podłoże.

Cele badawcze:

• izolacja drobnoustrojów ze środowiska;

• określanie liczebności drobnoustrojów;

• otrzymywanie czystych kultur bakterii;

• identyfikacja szczepów bakterii;

• przechowywanie szczepów bakterii.

Do jakich celów badawczych używa się pożywek?

Cechy podłoża:

1. Musi zawierać związki chemiczne odpowiednie do procesów wzrostu i dostarczania energii mikroorganizmom;

2. Musi mieć odpowiednie:

   • ciśnienie osmotyczne (izotoniczność środowiska);

   • potencjał oksydoredukcyjny (rH) (różny dla tlenowców i beztlenowców);

   • pH (zazwyczaj 7,0-7,6);

3. Musi być:

   • zbuforowane (by metabolity nie zmieniały pH hodowli);

   • odpowiednio wilgotne;

   • jałowe;

Dodatkowo powinno ono być klarowne (choć to nie zawsze możliwe).

Podaj cechy, którymi powinna charakteryzować się pożywka.

Skład chemiczny:

• źródło pierwiastków budulcowych (C, N, P, S);

• określone kationy metali;

• mikroelementy;

• źródło energii (tlen/brak tlenu);

• czynniki o działaniu wybiórczym (hamujące wzrost pewnych mikroorganizmów);

• wskaźniki pH (np. purpura bromokrezolowa, czerwień fenolowa);

• czynniki wzrostowe (auksotrofy);

• czynniki obniżające potencjał redoks (np. siarczek sodu, cysteina, kwas 2-merkaptoetanosulfonowy) (ścisłe beztlenowce).

Opisz skład chemiczny pożywek.

Klasyfikacja ze względu na skład podłoża:

• podłoża syntetyczne;

  • podłoże Davisa

• podłoża mineralne;

  • podłoże AB

• podłoża o nie w pełni zdefiniowanym składzie;

• podłoża złożone;

• podłoża minimalne;

  • podłoże Davisa; podłoże AB;

• podłoża pełne;

  • bulion odżywczy; agar odżywczy.

Opisz klasyfikację podłóż ze względu na skład.

Podaj przykład podłoża każdego rodzaju.

Klasyfikacja ze względu na konsystencję:

• podłoża płynne;

  • bulion odżywczy; bulion wzbogacony;

• podłoża półpłynne;

• podłoża stałe;

  • agar; agar odżywczy.

Opisz klasyfikację podłóż ze względu na konsystencję.

Podaj przykład każdego podłoża.

Klasyfikacja ze względu na zastosowanie:

• wybiórcze;

• różnicujące;

• wybiórczo-różnicujące.

Opisz klasyfikację podłóż ze względu na zastosowanie.

1. Mają ściśle określony skład ilościowy;

2. Mają ściśle określony skład jakościowy;

3. Bakterie rosną na nich wolniej niż na pełnych podłożach.

Przykład - podłoże Davisa.

Scharakteryzuj podłoża syntetyczne.

To podłoża zaliczane do podłoży syntetycznych.

1. Mają ściśle określony skład ilościowy;

2. Mają ściśle określony skład jakościowy;

3. Nie zawierają związków organicznych;

4. Bakterie rosną na nich wolniej niż na pełnych podłożach.

Przykład - podłoże AB.

Scharakteryzuj podłoża mineralne.

Zawierają składniki pochodzenia naturalnego.

W ich skład mogą wchodzić np. peptony, ekstrakty, hydrolizaty białkowe.

Scharakteryzuj podłoża o nie w pełni zdefiniowanym składzie.

Zaliczane są do podłoży o nie w pełni zdefiniowanym składzie.

W ich skład mogą wchodzić np. peptony, ekstrakty, hydrolizaty białkowe.

Są sporządzone z:

• naturalnych;

• niezmodyfikowanych;

• nieznacznie zmodyfikowanych;

surowców pochodzenia roślinnego lub zwierzęcego.

Scharakteryzuj podłoża naturalne.

Zaliczane są do podłoży o nie w pełni zdefiniowanym składzie.

W ich skład mogą wchodzić np. peptony, ekstrakty, hydrolizaty białkowe.

Dodatkowo mogą zawierać:

• ekstrakty z tkanek zwierzęcych;

• ekstrakty z tkanek roślinnych;

• ekstrakty z drożdży;

• cukier (zwykle glukoza);

• są zbuforowane.

Scharakteryzuj podłoża złożone.

To podłoża zawierające jedynie te związki, które są niezbędne do wzrostu danego mikroorganizmu.

Przykład dla Escherichia coli - podłoże Davisa.

Przykład dla Halothiobacillus neapolitanus - podłoże AB.

Scharakteryzuj podłoża minimalne.

To podłoża zawierające:

• związki niezbędne do wzrostu danego mikroorganizmu;

• składniki wpływające na optymalny wzrost bakterii.

Przykład dla Escherichia coli - bulion odżywczy, agar odżywczy

Scharakteryzuj podłoża pełne.

Podłoża płynne…

Zastosowania:

• namnożenie dużej biomasy mikroorganizmów;

• badanie wpływu czynników na mikroorganizmy.

Przykłady:

• bulion odżywczy:

  • ekstrakt mięsny (działanie gorącą wodą na mięso wołowe);

  • pepton (otrzymywany z tkanek roślinnych lub drożdży pod wpływem enzymów proteolitycznych);

  • 0,5% NaCl.

Opisz podłoża płynne.

Określ, do jakich celów się je stosuje.

Podaj przykłady podłoży płynnych.

Bulion odżywczy:

• ekstrakt mięsny (działanie gorącą wodą na mięso wołowe);

• pepton (otrzymywany z tkanek roślinnych lub drożdży pod wpływem enzymów proteolitycznych);

• 0,5% NaCl.

Opisz skład bulionu odżywczego.

Bulion wzbogacony:

• ekstrakt mięsny (działanie gorącą wodą na mięso wołowe);

• pepton (otrzymywany z tkanek roślinnych lub drożdży pod wpływem enzymów proteolitycznych);

• 0,5% NaCl;

• ekstrakt drożdżowy;

• enzymatyczny hydrolizat kazeiny.

Opisz skład bulionu wzbogaconego.

Bulion wzbogacony zawiera:

• białka;

• peptydy;

• aminokwasy;

• sole mineralne;

• witaminy;

• zasady purynowe;

• zasady pirymidynowe.

Jakie składniki organiczne zawiera bulion wzbogacony?

Do podłoża płynnego należy dodać:

• półpłynne - 0,1-0,7% agaru;

• stałe - 1-2% agaru.

Jak otrzymuje się podłoża półpłynne i stałe?

To składnik podłoży uzyskiwany z krasnorostów.

Głównym składnikiem jest polisacharyd zbudowany z:

• estrów soli wapniowych, galaktozy i kwasu siarkowego (VI);

• estrów soli magnezowych, galaktozy i kwasu siarkowego (VI).

Schemat estru:

• 2 (Reszta galaktozy - O - SO₃)Mg;

• 2 (Reszta galaktozy - O - SO₃)Ca.

Czym jest agar?

Jaki jest jego główny składnik?

1. Tworzy żel w wodzie o temperaturze 80-90oC;

2. Krzepnie w temperaturze 40-45oC; tworzy bezbarwną galaretkę bez smaku i zapachu;

3. Jego konsystencja nie zmienia się w temperaturach inkubacji płytek z podłożami stałymi (konsystencja stała do temperatury 65oC);

4. Nie zmienia właściwości po sterylizacji;

5. Nie jest trawiony przez większość mikroorganizmów.

Jakie są zalety agaru?

1. Określanie liczby bakterii;

   • (metody pośrednie):

2. Izolowanie czystych kultur;

   • (metody pośrednie);

3. Przechowywanie bakterii;

   • (na płytkach i skosach);

4. Identyfikacja bakterii;

   • (podłoża różnicujące).

Podaj zastosowania podłóż stałych.

1. Praca z bakteriofagami;

   • podłoże płynne + agar w stężeniu 0,7%;

2. Badanie zdolności bakterii do ruchu;

   • szczepienie igłą słupka zawierającego podłoże z 0,5% agaru;

3. Przechowywanie bakterii;

   • posiew na słupki zawierające podłoże z 0,7% agaru;

4. Hodowla bakterii beztlenowych aerotolerancyjnych i mikroorganizmów mikroaerofilnych;

   • dodanie 0,1% agaru dla zwiększenia lepkości.

Opisz skład podłóż półpłynnych w odniesieniu do zastosowania.

1. Żelatyna (10-15%)

   1. używana historycznie, niewygodna ze względu na niską temperaturę upłynniania i rozkładalność przez wiele bakterii;

2. Żel krzemionkowy (uwodniony ditlenek krzemu);

Nazwij inne czynniki używane do zestalania podłóż.

1. Gdy mikroorganizmy nie tolerują agaru;

2. Gdy mikroorganizmy mają właściwości agarolityczne;

3. Gdy podłoże musi być całkowicie mineralne;

4. Gdy badane są prokarioty ekstremofilne (niskie/wysokie pH, wysoka temperatura, wysokie ciśnienie hydrostatyczne).

Kiedy zamiast agaru stosuje się żel krzemionkowy?

Są one stosowane w celu wyizolowania z mieszaniny mikroorganizmów o konkretnych właściwościach fizjologicznych i metabolicznych.

Sprzyjają rozwojowi danej bakterii lub grupy bakterii o podobnych cechach, hamując jednocześnie wzrost innych drobnoustrojów.

Opisz podłoża wybiórcze.

Scharakteryzuj sposób ich selektywnego działania.

1. Dodanie do podłoża odpowiedniego czynnika selekcyjnego;

   • antybiotyk - przy izolowaniu bakterii opornych na dany związek;

   • NaCl o stężeniu 7,5% - przy izolowaniu gronkowców (Staphylococcus);

2. Brak określonych związków w podłożu;

   • brak związków organicznych - wzrost określonych autotrofów;

   • brak czynników wzrostowych - wzrost określonych prototrofów;

   • brak związków azotu - wzrost prokariotów wiążących azot cząsteczkowy.

Opisz sposoby hamowania wzrostu nieporządanych mikroorganizmów na podłożach wybiórczych.

Pierwotna izolacja określonego rodzaju mikroorganizmów z próbek zawierających gatunki wielu mikroorganizmów.

Efekt potęguje zastosowanie różnych warunków inkubacji:

• warunki beztlenowe - nie wyrosną tlenowce;

• wysoka temperatura - urosną tylko termofile.

Podaj główne zastosowania podłóż wybiórczych.

Są wykorzystywane do różnicowania spokrewnionych bakterii na podstawie:

• wyglądu ich kolonii;

  • kolor;

  • konsystencja;

  • rozmiar;

• wyglądu podłoża wokół kolonii.

Opisz zastosowania podłóż różnicujących.

Podłoża różnicujące mają wyłącznie konsystencję stałą.

• jest to spowodowane tym, że kolonie bakterii można uzyskać tylko na podłożach stałych.

Przykład podłoża różnicującego: agar z krwią.

Opisz jaką klasyfikację według konsystencji mają podłożą różnicujące, i dlaczego.

Podaj też przykład podłoża różnicującego.

Skład podłóż:

• składniki różnicujące;

  • powodują różnicowanie wyglądu kolonii i podłoża;

• składniki hamujące;

  • hamują wzrost określonych mikroorganizmów;

Opisz podłoża wybiórczo-różnicujące.

Wskaż również ich skład, który powoduje takie właściwości.

Przykład podłoża: podłoże EMB:

• pozwala wyizolować z kału, i rozróżnić pałeczki z rodziny Enterobacteriaceae;

• zawiera czynniki hamujące wzrost bakterii gramdodatnich;

• zawiera laktozę i barwniki pozwalające na różnicowanie bakterii:

  • zdolnych do rozkładu laktozy (Escherichia coli - bordowe kolonie);

  • niezdolnych do rozkładu laktozy (Salmonella spp. - białe kolonie).

Podaj przykład podłoża wybiórczo-różnicującego.

Wymień jego składniki oraz ich funkcje.

Podaj również obserwacje procesu różnicowania, wraz z nazwami bakterii.