Biofiz-Mikroskopia (mikroskopy)

Schemat budowy mikroskopu i promieni świetlnych

Funkcje części mikroskopu:

-układ obiektyw-okular

-kolektor

-kondensor

-przesłona aperturowa

-śruby mikrometryczne

-stolik

-minimalizacja wad wzrokowych i aberracji na obraz

-daje obraz światła w płaszczyźnie przesłony aperturowej

-przetwarza wiązki rozbieżne w zbieżne, dając obraz przesłony polowej

-regulacja rozbieżności światła wchodzącego do obiektywu

-przesuwanie układu optycznego

-jest

Co zrobić żeby zmienić:

-kontrastowość obrazu

-równomierność oświetlenia

-wielkość części oświetlonej

-zmień wielkość otworu apertury

-zmień położenie kondensor

-zmień wielkość przesłony polowej

Cechy obrazu mikroskopowego:

powiększony, odwrócony, pozorny

Cechy obrazu pozornego w oku obserwatora: …

pomniejszony, odwrócony, rzeczywisty

Wzory na powiększenie:

-mikroskopu

-obiektywu

-okularu

-p=h2/h(stosunek wymiarów liniowych do rozmiaru przedmiotu)=p1 x p2

-p1=h1/h

-p2=h2/h1

Bieg promieni w mikroskopie

Przybliżony wzór na powiększenie mikroskopu: …

p~L x d/f1 x f2

L-długość tubusu

d-długość dobrego widzenia

f1,2-ogniskowe obiektywu. okularu

Całkowite powiększenie mikroskopu wynosi: …

od 25 do 1500

Zdolność rozdzielcza to …

odwrotność między dwoma rozpoznawalnymi punktami preparatu

Wzór na zdolność rozdzielczą: …

delta=2n x sin alpha/lambda

n-współczynnik załamania obiektyw-preparat

alpha-kąt aperrturowy

lambda-długość fali światła

Warunek powiększenia użytecznego mikroskopu

500A <= p <= 1000A

A-apertura numeryczna obiektywu

Charakterystyka optyczna obiektywu mikroskopu: …

-rodzaj układu optycznego

-powiększenie

-apertura

-długość tubusu

-grubość szkiełka nakrywkowego

Przystawka rysunkowa

Całkowite odbicie od ściany pryzmatu→odbicie od szkiełka

Pomiar powiększenia drucikiem: …

drucik na stoliku→patrzeć na niego przy prostopadłej skali→wyznaczenie średnicy obrazu mikroskopu h2→obliczenie ze wzoru

Obraz w mikroskopie z okularem mikrometrycznym

Wzór na rzeczywistą wielkość przedmiotu pod okularem mikrometrycznym: …

h=h1/p1

h1-wielkość obrazu

p1-powiększenie obiektywu

Wyznaczenie powiększenia obiektywu okularem mikrometrycznym

Płytka ma podziałkę co 0,01mm→położyć na stolik i zmienić okular zwykły na mikrometryczny→nastawić krzyżyk na jedną z kresek→odczytać z bisektora milimetry, a z bębna śruby setne części milimetra (odczyt L1)→powtórzyć dla innej kreski (L2)

Wzór na powiększenie obiektywu przy użyciu okulara mikrometrycznego

p1=h1/p1=L2-L1/n x d

h1-odległość między obrazami kresek

n-liczba działek płytki wzorcowej pomiędzy obrazami kresek objętych pomiarem

d-szerokość jednej działki

Aby wyznaczyć rzeczywistą wielkość krwinki należy: …

wykonać pomiar h1 (wskazania okularu dla dwóch krańców krwinki→użyć wzoru

Krzywizna anizocytozy

Średnice krwinek wahają się w … do … mikrometrów, zwykle …

6, 8,5, 7

Jak między preparatem, a obiektywem umieści się ciecz o współczynniku załamania n, to rozdzielczość … . Tę metodę nazywa się … .

wzrośnie n-krotnie, immersją

Najczęstsze immersje i ich współczynniki załamania

olejek cedrowy-1,5

monobromonaftalen-1,66

Najmniejsza odległość dwóch rozróżnianych punktów najkrótszą falą świetlną wynosi …

200 nm

Do oglądania przezroczystych przedmiotów używa się … . Można do tego użyć …, albo …

obserwacji w ciemnym polu, kondensora ciemnego pola, oświetlenia skośnego

Ruch wiązek w ciemnym polu

Jasne związki widzimy przez ….

wiązki światła, które zostały ugięte przez drobiny w preparacie

Ultramikroskop to …

mikroskop, gdzie jest boczne oświetlenie preparatu

Schemat ultramikrosopu

Różnica faz i promienie w kontraście fazowym

Jeżeli dwa wiązki promieni przechodzą przez punkty o grubości D, ale o różnych n to …

przesuną się względem siebie o kąt phi

Mechanizm mikroskopu fazowego

Wiązki idące przez pierścień A i bezpośrednio B dają obraz jak na siatce dyfrakcyjnej, czyli amplitudowy→jednostajnie obserwowany preparat daje obraz w mikroskopie ukazujący się jako fazowy (o jednym n są jasne, o innym ciemne)

Do preparatów anizotropwych używa się …

mikroskopu polaryzacyjnego

Różnica mikroskopu polaryzacyjnego od zwykłego: …

zastosowanie nikoli i polaroidów

Działanie mikroskopu polaryzacyjnego

polaryzator pod stolik przed kondensor, analizator w tubusie→stolik obrotowy ma podziałkę kątową→zmiana położenia obiektu (względem kondensora) daje pojawiające i znikające kontrasty→różne kontrasty są wynikiem zmian światła idącego przez polaryzator→te zmiany są mierzone

Podstawowe parametry obiektów anizotropowych

-wielkość podwójnego załamania

-ilość osi optycznych i ich orientacja przestrzenna

-skręcenie płaszczyzny polaryzacji

Jeżeli w płynie maziówkowym dwójłomność jest ujemna to znaczy, że mogą tam być … powodujące …

moczany jednosodowe, dnę

Jeżeli w płynie maziówkowym dwójłomność jest dodatnia to znaczy, że mogą tam być … powodujące …

pirofosforan wapnia, pseudodna lub chrzęstniak