parcial 2 TMAC

ME aclarante

oxido de propileno

ME fijadores

glutaraldehido (entrecruza proteinas), tetróxido de osmio (puentes entre los enlaces insaturados de las cadenas de ácidos grasos)

paso más crítico en ME

fijación

para una buena fijación en ME hay q tener en cuenta:

1. Temperatura 2. Tamaño (Relación Superficie/Volumen) 3. Velocidad de difusión / poder de penetración 4. pH 5. Osmolaridad de la solución fijadora 6. Concentración de iones (Ionic environement) 7. Concentración del fijador

relación SV en fijacion por inmersion

1mm³

Definición: coeficiente de difusión

Distancia en mm que el fijador penetra en el tejido después de 1 h de fijación

ME. colores corte de ultramicrotomo y sus grosores:

GRIS: 60nm (alta resolucion)

PLATEADO: 90nm (estudios ultraestructurales)

ORO: 90-150 (menor aumento y autorradiografia)

PÚRPURA: 150-190 (muy grueso)

T a la que dejan de haber cambios estructurales

130 K

crioprotectores penetrantes

Glicerol

Dimetilsulfoxido (DMSO)

1-2 Propanodiol

Etilenglicol

crioprotectores no penetrantes

Dextrano

Polivinilpirolidona(PVP)

Albumina de suero

Ficol

Agarosa (lowmelt)

Sacarosa

A niveles de presión atmosférica y con condiciones óptimas, solamente se puede vitrificar una profundidad de:

30 um (periferia de la muestra)

El uso de crioprotectores permite congelar objetos de hasta:

1 mm

Con liquidos criogenicos. Sin crioprotectores, para conseguir un máximo de profundidad de X, tasas de enfriamiento de X

30 um / 10^4 K/s

Los gases líquidos con “Boiling Point” bajo (He, N2) solo pueden ser usados como CRIOGÉNOS…

PRIMARIOS

Propano, Etano, hidrocarbonos halogenados

criógenos SECUNDARIOS

para congelar suspensiones de células o partículas que tengan poca viscosidad:

Spray Freezing

para congelar muestras delgadas y laminares, como cultivos celulares o monocapas de partículas en suspensión

Inyección en placas metálicas

cómo se consigue el contraste en CRIO-EM?

El contraste se consigue mediante comparación de imágenes que consiguen generar imágenes basadas en CONTRASTE DE FASES

que es la criosustitución?

se sustituye el agua de la muestra congelada con una solvente orgánico, que normalmente contiene fijadores químicos. Se realiza a bajas Tª para evitar la formación de cristales de hielo que dañen la muestra criofijada, mediante sublimación del agua presente.

para qué se usa la criosustitución?

estudios inmunocitoquímicos y de citoquímica de enzimas

cuanta profundidad expone el criograbado profundo?

1 um

resolución microscopía de barrido por sonda

0,01 Amstrong → representaciones atómicas de las muestras

desplazamientos en microscopía de barrido por sonda

en la superficie de la muestra de hasta 150 μm en plano y 10-15 μm en altura

V/F la microscopía de fuerzas atómicas requiere que la muestra sea conductora

falso

qué emisiones son las más usadas en autorradiografía

emisiones beta

parámetros del proceso de desintegración de isótopos radiactivos

1. Energía de la radiación emitida (se mide en eV)

2. Vida media

Tanto las emulsiones como las películas fotográficas pueden alcanzar resoluciones de hasta…

1 um

tamaño secciones histológicas del animal completo?

20-50 μm

resolución de phosphor screen:

~70 μm