2 tema lab.metodai

Antibiotikų klasifikacija

• Penicilinai ir beta-laktamazės inhibitoriai;

• Cefalosporinai;

• Karbapenemai ir monobaktamai;

Kas yra antibiotikograma?

laboratorinio tyrimo

rezultatas, išskirtos bakterijos padermės

jautrumui skirtingiems antibiotikams

nustatyti.Nustatomas in vitro jautrumas

Jautrumo antibakteriniams vaistams

nustatymo metodai

Fenotipiniai,genotipiniai,dedukciniai

Fenotipiniai jautrumo antibiotikams

tyrimo metodai

• Diskų difuzijos;

• Praskiedimų;

• E testų

Fenotipinis metodas remiasi

Lūžio taškais ir minimalios slopinančios konc. nustatymu

Diskų difuzijos metodas, Kirby–Bauer metodo esmė?

Ant bakterijomis apsėto agaro dedami antibiotikų diskeliai. Antibiotikai sklinda į terpę ir stabdo jautrių bakterijų augimą. Po 16–24 val. matuojama augimo slopinimo zona aplink diskelį – kuo ji didesnė, tuo bakterija jautresnė antibiotikui.

Nuo ko priklauso inhibicijos zonos dydis?

Nuo terpės, bakterijų koncentracijos, bakterijų augimo ypatumų, antibiotiko difuzijos ir koncentracijos diske bei bakterijos jautrumo antibiotikui.

Koks ryšys tarp inhibicijos zonos, bakterijos jautrumo ir MSK?

Kuo didesnė inhibicijos zona, tuo bakterija jautresnė antibiotikui ir tuo mažesnė MSK.

Praskiedimo metodas:Buljono praskiedimas

Iš eilės daromi dvigubi antibiotikų skiedimai

(1, 2,4,8 ir 16 µl) ir supilstomi į mėgintuvėlius

su bakterijomis ir mitybine terpe. Inkubuojama

per naktį 35ºC. Vertinamas terpės drumstumas

Praskiedimo metodas:agaro praskiedimas

Antibiotikai yra įpilami į agaro terpę. Tada ant

agaro paviršiaus užsėjamos tiriamų bakterijų

kultūrų suspensijos

Praskiedimo metodas:mikropraskiedimų

• Dažniausiai naudojamos 96 šulinėlių

plokštelės, kurios talpa 0,1 ml.

• Augimas ir MSK gali būti įvertinamos

specializuotų optinių instrumentų dėka.

• Metodas standartizuotas ir „lepioms“

bakterijoms

Mikropraskiedimu metodo privalumai ir trūkumai

• Privalumai: nustato MSK ir MBK; universalus.

• Trūkumai: sunku aptikti užteršimą; 1 praskiedimo paklaida

Kas yra E testas?

Antibiotikų jautrumo nustatymo metodas, kuriuo nustatoma MSK naudojant antibiotiko koncentracijų gradientą turinčią juostelę. Taip pat padeda aptikti ESBL gaminančias bakterijas.

Kas yra MSK

mažiausia priešmikrobinio vaisto koncentracija

(mg/l) inhibuojanti vizualinį tiriamų bakterijų

augimą įprastomis sąlygomis

Kas yra MBK

mažiausia priešmikrobinio vaisto koncentracija

(mg/l) nužudanti 99,9% tiriamų bakterijų

pirminiame inokuliate įprastomis sąlygomis

Kaip interpretuojami antibiotikų jautrumo tyrimo rezultatai?

Nustatytos slopinimo zonos arba MSK reikšmės lyginamos su CLSI ir EUCAST nustatytais lūžio taškais, kad būtų įvertintas mikroorganizmo jautrumas antibiotikui.

Ką reiškia J raide atsakymuose

Mikroorganizmas jautrus→stnadeatine antibiotiko doze

VidJ reiksme

Jautrus tik esant padid. ekspzicijai→didesnė dozė, didesnė konc.audiniuose

A reiksme

atsparu→nesėkmė, net ir padidinus vaisto ekspozicija

Diskų difuzijos metodo pagr. sąlygos?

Agaras + diskai, 16–20 h inkubacija, tinkama atmosfera, aiškios slopinimo zonos.

Kokios disku metodo paruosimo salygos

MH agaras, 0,5 McFarland, 16–20 h inkubacija, tinkama atmosfera.

Kaip ruošiamas inokuliatas?

Kolonijos → fiziologinis tirpalas → 0,5 McFarland → sunaudoti per 15–60 min.

Kaip sėjama ir dedami diskai?

Tamponu paskleidžiama 3 kryptimis, diskai dedami per ≤15 min, nejudinami.

Kas svarbu po inkubacijos?

Turi būti tolygus augimas; netolygumas → testą kartoti.

Automatinių sistemų tikslas?

Greitai, standartizuotai ir automatiškai nustatyti bei interpretuoti antibiotikų jautrumą.

Genotipiniai (molekuliniai) antibiotikų

jautrumo nustatymo metodai

• Polimerazės grandininė reakcija (PGR);

• DNR mikrogardelių technologija;

• DNR lustai;

• Izoterminio pagausinimo (LAMP)metodas

Kas aptinkami genotipinio jautrumo nustatymo metodais

tik dažniausiai sutinkami

atsparumo mechanizmus koduojantys genai,

bet nenustatomas jautrumas antibiotikams

,,Microfluidics” metodas

• Analizei užtenka vienos ląstelės.

• Gali nustatyti jautrumą antibiotikams per

kelias valandas. Jeigu taikomos nano

technologijos, tai per 30 min.

• Klinikinėje praktikoje dar nenaudojama