ELISA

Hvad står ELISA for?

Enzyme Linked Immunosorbent Assay

Hvad betyder Enzyme Linked i ELISA?

At detektionsantistoffet er koblet (konjugeret) til et enzym

Hvad betyder Immunosorbent Assay?

At analysen foregår på en fast fase, hvor immunreaktanter kan bindes og ubundne stoffer vaskes væk

Hvilke krav stilles til mærker/labels i immunoassys?

• Let at koble til antigen eller antistof

• Må ikke påvirke antigen-antistof binding

• Let at måle med højt signal/støj forhold

• Billige

• Ikke toksiske og miljøvenlige

Hvilke enzymer bruges oftest i ELISA?

HRP (Horse Radish Peroxidase)

AP (Alkalisk phosphatase)

Hvad er et kromogent substrat?

Et substrat hvor enzymet omdanner et farveløst stof til et farvet produkt

Hvad er et fluorescerende substrat?

Et substrat der omdannes til et fluorescerende produkt

Hvad er et chemiluminescent substrat?

Et substrat der omdannes til et stof der udsender lys

Hvilket substrat bruges ofte sammen med HRP i ELISA?

TMB (Tetramethylbenzidin)

Hvad sker der når HRP reagerer med TMB og H2O2?

TMB oxideres og bliver blå

Hvad sker der når man stopper reaktionen med svovlsyre (H2SO4)

Farven ændres fra blå til gul

Ved hvilken bølgelængde måles absorbansen typisk i ELISA med TMB?

450 nm

Hvad er det første trin i en ELISA analyse?

Coating af brønden med antistof (adsorption)

Hvorfor blokeres plastoverfladen efter coating?

For at forhindre uspecifik binding

Hvad tilsættes derefter i en sandwich ELISA?

Patientprøve med antigen

Hvad tilsættes efter patientprøven?

Et enzymkonjugeret antistof?

Hvad tilsættes til sidst for at udvikle signalet?

Et substrat som enzymet danner

Hvorfor vasker man mellem ELISA-trin?

For at fjerne ubundne immunreaktanter

Hvorfor stoppes enzymreaktionen efter en bestemt tid?

For at alle prøver måles ved samme reaktionstid og kan sammenlignes

Hvordan bestemmes koncentrationen af et antigen i ELISA?

Vha standardkurve

Hvad indeholder standardkurven?

Kendte koncentrationer af antigen

Hvordan kan ELISA-princippet bruges i imunhistokemi?

Antistoffer koblet til enzym farver væv hvor antigenet findes

Hvad viser brun farvning i en ventrikelbiopsi ved IHC?

Tilstedeværelse af bakterien Helicobacter pylori

Er immunhistokemi typisk kvantitativ eller kvalitativ?

Kvalitativ

Hvad er et eksempel på en ELISA-lignende hurtigtest?

Graviditetstest

Hvad detekterede 1 generations HIV ELISA?

IgG antistoffer mod HIV

Hvad forbedrede 2 generations HIV ELISA?

Brug af rekombinante HIV antigener

Hvad kan 3 generations HIV ELISA detektere?

IgG og IgM antistoffer mod HIV

Hvad kan 4 generations HIV ELISA detektere?

HIV antigen

IgG og IgM antistoffer mod HIV

Hvorfor er udviklingen af HIV ELISA vigtig?

Den gør det muligt at opdage infektionen tidligere og øger sensitivitet og specificitet