Maturation des ARNm

Quelles modifications subissent les ARN eucaryotes ?

→ Addition de la coiffe

→ Polyadénylation

→ Épissage

Comment est mise en place la coiffe ?

CEC (Capping enzyme complex) associé à ARN pol II transféré à l’extrémité 5’ sortante de l’ARNm pour initier le processus de "capping"

Quelle est la structure de la coiffe ?

Guanidine liée à l’extrémité 5’

Quelles sont les activités enzymatiques de la coiffe ?

→ Activité phosphatase

→ Activité guanydyl transférase

→ Activité méthylase

Que permet la polyédénylation de l’ARNm ?

La maturation en 3’

Qui réalise la polyadénylation ?

→ CPSF : Cleavage and Polyadenylation Speficity factor

→ CstF : Cleavage Stimulation Factor

Que font CPSF et CstF ?

Entrainent clivage ARN au niveau de nucléotides CA permettant d’introduire plusieurs A (20 par 20) sans nécessiter de matrice

PABP

→ Poly A Biding Protein

→ Protège la queue poly A

→ Sans PABP arrêt de poly A

Que permet la présence de la Coiffe en 5’ et et de la Polyadénylation en 3’ ?

→ Exportation de l’ARNm vers le cytoplasme

→ Protection de l’ARNm (5’ exonucléases)

→ Traduction

Quelles sont les 2 étapes de la réaction catalytique d’épissage ?

→ Coupure en 5’ des introns = formation lasso intermédiaire + excision exon 1

→ Coupure en 3’ de l’exon = lasso final + rapprochement exons

Comment mettre en évidence l’épissage sur gel ?

→ Retard de migration des boucles

A quoi correspond le spliceosome ?

→ = complexe ribonucloprotéique

→ small nuclear RiboNucleoprotein Particles = snRNPs

→ 5 sous unités : U1 , U2, U3, U4 et U5

Que nécessite l’assemblage et l’activité du spliceosome ?

Nécessite de l’ATP

Rôle du spliceosome

Catalyse l’épissage en réalisant les deux étapes

Que font U1 et U2 ?

Ils interagissent avec les séquences consensus :

• Si mutation : blocage épissage

• Si mutation compensatoire : restauration de l’épissage

Quel ets la fraction de de gènes qui donnent lieu à un épissage alternatif ?

> 90%

Exons constitutifs

Toujours inclus dans l’ARNm final

Exons régulés

Parfois inclus, parfois exclus

Quels sont les types d’épissage alternatif ?

→ Exon skipping inclusion

→ Alternative 3’ splice sites

→ Alternative 5’ splice sites

→ Mutually exclusive exons

Bilan sur l’épissage

→ Uniquement chez les eucaryotes

→ Modification post-transcriptionnelle qui a lieu dans le noyau (nucléaire)

→ Comprime l'information génétique lorsqu'il est alternatif : effet combinatoire à l'origine de différentes protéines isoformes

→ Les épissages alternatifs d'un même gène peuvent être différents selon les cellules ou le moment du développement