1.Techniki immunoizolacji, cytometria przepływowa

Mat. do badań imm. powinien być: … (4)

mieć żywe kom.

świeży

nieutrwalony, pobrany sterylnie

dokładnie opisany

Do imm.fenotypowania korzysta się z mat. : … (5)

krew obwodowa

szpik

płyn mózg-rdz

wysięki jam

mat. tk.

Metody izolacji leukocytów: … (4)

w gradiencie gęstości

panning

MACS

FACS

Gradient to …

mieszanina wysoko-cz. polimerów o określonej gęstości i lepkości

Cechy gradientu: …(5)

izoosmotyczny

nietoksyczny

niepenetrujący

nisko lepki

łatwy do wypłukania

PBMC to …, inaczej ….

peryferyjne komórki jednojądrzaste

limfocyty

Zależnie od użytego gradientu można dostać różne podziały

Do oceny żywotności limfocytów używa się …

trypanu

Trypan atakuje kom., które się przed nim bronią

Kom. … barwią się na …, kom. … …

martwe, niebiesko

żywe, nie barwią się

Do określenia liczebności kom. stosuje się …

komorę Thoma

Immunofenotyp to …

zbiór Ag charakterystyczny dla danej kom. lub populacji

U zdrowych osób lim.T jest … więcej niż lim.B

3x

W. ref. CD4+/CD8+=…-…

1,1, 1,7

Subpopulacje lim. wydziela się na podstawie …

pełnionych przez nie funkcji

Jeżeli lim. wydziela INF-gamma to najprawdopodobniej jest to limfocyt …

Th1

Zasada immunopanningu: …

W dołkach znajdują się specyficzne Ig, które wiążą konkretne Ag na powierzchni Ab. Potem eluuje się niezwiązane elem.

Metoda immunoseparacji (MACS): …

-W kolumnie znajduje się złoże z metalowymi kulkami sprzężonymi z Ig

-Porządane kom. są inkubowane z Ig, które łączą się ze swoistymi Ag

-R-r przepływa przez kolumnę na którą oddziałuje magnes, na kolumnie osadza się osad skoniugowanych kom.

-Reszta syfu wypływa do eluentu

-Po oddzieleniu syfu można eluować upragnione kom.

MACS można rozdzielać pozytywnie dla … lub negatywnie dla …

upragnionych Ab

syfu

Cytometrię przepływową stosuje się dla … kom.

żywych

W cytometrii występują 2 promienie:

…-…, która określa … kom.

…-… która określa … kom.

FSC, rozproszenie przednie, wielkość

SSC, rozproszenie boczne, ziarnistości

Główne frakcje na wykresie cytometrycznym: … (3)

monocyty

limfocyty

eo- i neutrofile

Fluorochromami w cytometrii są …

znakowane Ig

Intensywność fluorescencji jest wprost proporcjonalna do …

ilości miejsc wiążących Ig

2 główne rodzaje wykresów cytometrycznych: …

dot-blot

histogram

Bramkowanie to …

selekcja danej populacji w oparciu o dany paramter

Ocena w cytometrii przepływowej dwukolorowej

Rodzaje kontroli przeprowadzanych w cytometrii przepływowej: … (6)

Czysta próba pacjenta (czy się nie świeci)

Kontrola z I i II-rzędowymi Ab (kontrola specyficznych i niespecyficznych wiązań)

Kontrola izotypowa (takie same izotypy Ab, ale jedne z nich nie mają paratopu) (wyznacza falę negatywną przez overlap)

Kontrola kompensacji (eliminuje problematyczne obszary zachodzących na siebie widm) (złe bo nie wiadomo czy to negatywne, czy pozytywne

Kontrola żywotności (wizualizacja martwych kom. w próbie)

W przeciwieństwie do cytometrii FACS kom. po FACS można stosować w dalszych badaniach

Wykorzystania cytometrii: … (5)

hematologia

transfuzjologia

transplantologia

immunologia kliniczna

inne

W diagnostyce białaczek cytometria powinna być równolegle z … (3)

oceną hematologiczną rozmazu

mielogramu

badań cytochemicznych