Chapitre 4 : Réplication et traduction du génome des virus ARN

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1
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Quelles sont les trois classes principales de virus à ARN et donne un exemple pour chacune ?

  • Classe 3 : Virus à ARN double brin → Exemple : Rotaviridae

  • Classe 4 : Virus à ARN simple brin positif (ARN+) → Exemples : Flaviviridae, Picornaviridae, Coronaviridae

  • Classe 5 : Virus à ARN simple brin négatif (ARN–) → Exemples : Filoviridae, Orthomyxoviridae, Rhabdoviridae → Ils doivent emmener l’ARN polymérase dans le virion

2
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Quelle est la particularité des virus de la classe 6 (ARN+) par rapport aux autres virus à ARN ?

  • Bien qu'ils aient un ARN+, ils ne peuvent pas être directement traduits en protéines.

  • Leur génome n’est pas reconnu comme ARNm.

  • Ils utilisent une transcriptase inverse (RT) pour produire un ADN double brin, qui sera ensuite transcrit en ARNm.

  • Ils passent donc par un stade ADN, contrairement aux classes 3, 4 et 5.

3
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Pourquoi ne parle-t-on pas de transcription au sens classique pour les virus à ARN ?

  • La transcription classique est basée sur l’ADN → ARNm.

  • Chez les virus à ARN, les messagers sont créés directement à partir de l’ARN.

  • La "transcription" devient une forme de réplication.

  • On parle de transcription pour produire les ARNm, et de réplication pour produire de nouveaux génomes viraux.

4
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Qu’est-ce qui caractérise un ARNm viral fonctionnel dans une cellule eucaryote ?

  • Une séquence codante avec un codon START et un codon STOP.

  • Présence de régions UTR.

  • Une coiffe 5’ (cap) pour reconnaissance par les ribosomes.

  • Une queue poly(A) à l’extrémité 3’.

<ul><li><p class="">Une <strong>séquence codante</strong> avec un <strong>codon START</strong> et un <strong>codon STOP</strong>.</p></li><li><p class="">Présence de <strong>régions UTR</strong>.</p></li><li><p class="">Une <strong>coiffe 5’</strong> (cap) pour reconnaissance par les ribosomes.</p></li><li><p class="">Une <strong>queue poly(A)</strong> à l’extrémité 3’.</p></li></ul><p></p>
5
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Quelle est la taille typique des génomes des virus à ARN et leur structure générale ?

  • Taille : 7 à 32 kilobases (kB).

  • Généralement plus petits que les génomes des virus à ADN.

  • Bien qu'ils paraissent linéaires, ils présentent souvent des repliements structuraux → nécessaires à la réplication et à la production des ARNm.

6
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Quelles sont les conséquences du fait d’avoir un génome ARN (et non ADN comme les cellules) ?

  • Il n’existe pas de RNA polymérase RNA-dépendante cellulaire capable de copier de longs segments.

  • Ces virus doivent donc coder leur propre ARN polymérase, et parfois même l’emporter dans le virion (classe 5 notamment).

  • Exception : Virus de l’hépatite D, qui utilise une ARN polymérase ARN-dépendante cellulaire.

  • Les séquences doivent être copiées fidèlement malgré l'absence de correction d'erreurs.

7
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Quels virus à ARN peuvent être directement traduits dès leur entrée dans la cellule ?

  • Virus à ARN+ (classe 4)

  • Leur ARN est nu (sans protéines), sauf exceptions : rétrovirus et coronavirus.

  • Leur génome est soit :

    • coiffé et polyadénylé (poly-A)

    • ou contient une IRES (Internal Ribosome Entry Site) pour être reconnu par les ribosomes sans la coiffe et la queue

8
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Tous les virus à ARN codent-ils leur propre ARN polymérase ?

  • Oui, sauf le virus de l’hépatite D, qui utilise une ARN polymérase cellulaire.

  • Les virus des classes 3 et 5 emportent leur ARN polymérase dans le virion car leur ARN ne peut pas être directement traduit.

9
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Caractéristiques des virus à ARN double brin (classe 3) ?

  • Exemple : Reoviridae (rotavirus) responsables de gastro-entérites

  • La cellule ne peut pas synthétiser d’ARNm à partir de ce génome.

  • Le virion contient une ARN polymérase dans sa capside.

<ul><li><p class="">Exemple : <strong>Reoviridae (rotavirus) responsables de gastro-entérites</strong></p></li><li><p class="">La cellule ne peut pas synthétiser d’ARNm à partir de ce génome.</p></li><li><p class="">Le <strong>virion contient une ARN polymérase</strong> dans sa capside.</p></li></ul><p></p>
10
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Caractéristiques des virus à ARN simple brin positif (classe 4) ?

  • Leur génome peut être immédiatement traduit.

  • Reconnus par les ribosomes car ils possèdent :

    • une coiffe et queue poly(A)

    • ou une IRES

  • Génome nu sans protéines associées sauf exceptions (Coronavirus, Rétrovirus).

  • Ils produisent un ARN– anti-génomique servant de matrice pour répliquer le génome. (toujours avec une ARN polymérase virale)

<ul><li><p class="">Leur génome <strong>peut être immédiatement traduit</strong>.</p></li><li><p class="">Reconnus par les ribosomes car ils possèdent :</p><ul><li><p class="">une <strong>coiffe et queue poly(A)</strong></p></li><li><p class="">ou une <strong>IRES</strong></p></li></ul></li><li><p class="">Génome <strong>nu</strong> sans protéines associées sauf exceptions (Coronavirus, Rétrovirus).</p></li><li><p class=""><span style="color: #ec0808">Ils produisent un <strong>ARN– anti-génomique</strong> servant de matrice pour répliquer le génome. (toujours avec une ARN polymérase virale)</span></p></li></ul><p></p>
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Caractéristiques des virus à ARN simple brin négatif (classe 5) ?

  • Génome toujours associé à des protéines (ARN polymérase et protéines de capsides).

  • Nécessitent d’avoir l’ARN polymérase virale dans le virion.

  • Produisent :

    • un ARN+ anti-génomique → matrice pour le génome

    • un ARN subgénomique (plus court que la séquence complète du génome) → traduit en protéines virales, dont l’ARN polymérase qui doit être emmené dans le virion.

<ul><li><p class="">Génome toujours <strong>associé à des protéines</strong> (ARN polymérase et protéines de capsides).</p></li><li><p class="">Nécessitent d’avoir l’<strong>ARN polymérase virale dans le virion</strong>.</p></li><li><p class="">Produisent :</p><ul><li><p class="">un <strong>ARN+ anti-génomique</strong> → matrice pour le génome</p></li><li><p class="">un <strong>ARN subgénomique (plus court que la séquence complète du génome)</strong> → traduit en protéines virales, dont l’ARN polymérase qui doit être emmené dans le virion.</p></li></ul></li></ul><p></p>
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Où se passe le cycle de la majorité des virus à ARN ? Quelle est l’exception ?

  • La majorité du cycle se passe dans le cytoplasme → là où se fait la traduction. Ils n’ont donc normalement pas besoin de la machinerie cellulaire

  • Exception : Orthomyxoviridae (grippe)le cycle passe par le noyau.

13
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Quelles similarités structurelles observe-t-on entre les différentes types de polymérases (RNA-polymérases et DNA-polymérases) ?

  • Elles partagent des motifs structuraux communs (motifs de A à D) visible en cristallographie

  • Ces similitudes sont telles qu’il est difficile de les distinguer par leur structure seule.

  • Le site catalytique (zone où s’incorporent les nucléotides) est très similaire entre les polymérases, bien qu’elles utilisent des substrats différents (ARN ou ADN).

  • Les polymérases ont donc une origine évolutive commune, avec une conservation du mécanisme enzymatique.

14
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Quelles sont les différences de substrat et de produit entre l’ADN polymérase et l’ARN polymérase ?

  • L’ADN polymérase utilise de l’ADN comme matrice et produit de l’ADN.

  • L’ARN polymérase utilise de l’ARN comme matrice et produit de l’ARN.

  • L’ARN contient de l’uracile à la place de la thymine.

  • Le sucre est un ribose dans l’ARN (vs désoxyribose dans l’ADN).

  • L’élongation de la chaîne se fait dans le sens 5’ → 3’ pour les deux.

15
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Quelle est la fidélité de l’ARN polymérase virale par rapport à l’ADN polymérase ?

  • Peu fidèle : 1 erreur / 10⁴ à 10⁵ nt.

  • Pas de correction d’erreur.

  • ADN polymérase : bien plus fidèle (1 / 10⁸ à 10⁹ nt).

16
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Conséquences de cette faible fidélité ?

  • Plus de mutations.

  • Variabilité génétique élevée.

  • Meilleure adaptation, échappement immunitaire.

17
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Effet d’une ARN polymérase rendue plus fidèle ?

  • Pas d’impact majeur sur le virus.

  • Grande production de particules → au moins une fonctionne.

18
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Quelle propriété favorise les recombinaisons ?

  • L’ARN polymérase peut changer de matrice pendant la réplication (template switching).

  • Ex : poliovirus.

19
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Début de la synthèse d’ARN : comment ?

  • Démarre à des sites précis.

  • Avec ou sans amorce.

  • Parfois sans matrice (rare, ne concernent que quelque nucléotide).

20
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Quelles familles de virus de la classe 4 (ARN+) infectent l’homme ?

  • Flaviviridae : virus enveloppés → Hépatite C, fièvre jaune, dengue

  • Togaviridae : virus enveloppés → Rubéole, Chikungunya (présent en République Dominicaine et aux Caraïbes)

  • Coronaviridae : virus enveloppés → SARS-CoV, MERS-CoV (respiratoires aigus et potentiellement mortels), HCoV (rhumes ou grippes)

  • Picornaviridae : virus nus → Hépatite A, rhinovirus (rhume), poliovirus (poliomyélite)

  • Calciviridae : virus nus → Norovirus (gastroentérites)

  • Hepeviridae : virus nus → Virus de l’hépatite E (endémique en Asie et certaines régions d’Afrique)

21
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Quelle est la particularité des virus à ARN+ par rapport à la présence de protéines liées au génome ?

  • Les virus à ARN+ ne sont pas recouverts par des protéines (contrairement à la classe 5)

  • Exception : Coronaviridae, qui ont une capside hélicoïdale avec des nucléoprotéines entourant le génome

  • Structure : majoritairement icosaédrique pour les virus ARN+ infectant l’homme

  • D’autres virus (comme les Lolavirus, qui infectent les plantes) peuvent ne pas avoir cette structure et contenir des protéines liées au génome

22
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Comment se fait la traduction du génome des virus à ARN+ ?

  • Le génome ARN+ peut être directement traduit par les ribosomes cellulaires

  • Le virus code pour sa propre ARN polymérase, indispensable à la réplication

  • La synthèse d’un brin ARN- anti-génomique est nécessaire pour :

    • Réplication du génome

    • Production de nouveaux ARNm

  • Le génome code aussi pour des protéines de capside, de matrice et, pour certains, d’enveloppe

<ul><li><p class="">Le génome ARN+ peut être <strong>directement traduit</strong> par les ribosomes cellulaires</p></li><li><p class="">Le virus code pour sa propre <strong>ARN polymérase</strong>, indispensable à la réplication</p></li><li><p class="">La <strong>synthèse d’un brin ARN- anti-génomique</strong> est nécessaire pour :</p><ul><li><p class="">Réplication du génome</p></li><li><p class="">Production de nouveaux ARNm</p></li></ul></li><li><p class="">Le génome code aussi pour des protéines de capside, de matrice et, pour certains, d’enveloppe</p></li></ul><p></p>
23
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Comment s’organise le génome des Flaviviridae ?

Le génome est un long ARNm polycistronique (contrairement à l’ARNm cellulaire monocistronique qui ne code pour une seule protéine) car toutes les parties codantes sont à la suite l’un de l’autre.

<p><span>Le génome est un </span><strong>long ARNm polycistronique</strong><span> (contrairement à l’ARNm cellulaire monocistronique qui ne code pour une seule protéine) car toutes les parties codantes sont à la suite l’un de l’autre.</span></p>
24
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Comment le génome des Falviviradae est-il traduit ?

  • Traduction donne une polyprotéine, ensuite clivée en protéines fonctionnelles par des protéases virales et cellulaires

  • Traduction se fait via la machinerie cellulaire

  • Coiffe + queue polyA → reconnaissance par les eIF (eukaryotic translation initiation factors)

  • Le complexe de traduction se forme avec :

    • eIF4E (reconnaît la coiffe)

    • eIF3 (lie la petite sous-unité ribosomale 40S)

    • Scanning jusqu’au codon start AUG → grande sous-unité 60S s’associe → début de la traduction grâce à l’intervention d’un premier ARNt

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Tous les Flaviviridae possèdent-ils une coiffe ?

  • Non !

  • West Nile virus et Zika virus : possèdent une coiffe → traduction classique

  • Virus de l’hépatite C : pas de coiffe, utilise un IRES (internal ribosome entry site)

    • Permet la liaison directe à la 40S sans protéines accessoires

    • Repliement structurel reconnu par les ribosomes

    • IRES ≠ séquence, c’est une structure ARN tridimensionnelle

26
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Comment se déroule la traduction et réplication chez les Picornaviridae (ex : poliovirus, rhinovirus) ?

  • Génome contient une protéine VPg liée à l’ARN +

  • Queue poly A présente

  • VPg est éliminée avant traduction → Ne sert qu’à la réplication

  • Pas de coiffe → Utilisation d’un IRES pour recruter les ribosomes

  • Traduction d’une polyprotéine, clivée uniquement par des protéases virales

<ul><li><p>Génome contient une protéine VPg liée à l’ARN +</p></li><li><p>Queue poly A présente</p></li><li><p>VPg est éliminée avant traduction → Ne sert qu’à la réplication</p></li><li><p>Pas de coiffe → Utilisation d’un IRES pour recruter les ribosomes</p></li><li><p>Traduction d’une polyprotéine, clivée uniquement par des protéases <strong>virales</strong></p></li></ul><p></p>
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Comment a-t-on mis en évidence que certains ARN viraux peuvent être traduits sans coiffe ?

  • En observant des structures repliées sur certains ARNm viraux appelées IRES (internal ribosome entry site)

  • On a utilisé un ARNm bicistronique (2 séquences codantes) :

    • La 40S se fixe à la coiffe → production de la 1re protéine

    • Peu de production pour la 2e sans IRES

    • Ajout d’un IRES entre les deux → production de la 2e protéine

  • En modifiant la sous-unité 40S pour empêcher la fixation à la coiffe :

    • Plus de production du tout

    • Ajout d’un IRES → production uniquement de la 2e protéine
      → Preuve d’une entrée interne indépendante de la coiffe et du scanning

<ul><li><p class="">En observant des <strong>structures repliées</strong> sur certains ARNm viraux appelées <strong>IRES</strong> (internal ribosome entry site)</p></li><li><p class="">On a utilisé un <strong>ARNm bicistronique</strong> (2 séquences codantes) :</p><ul><li><p class="">La 40S se fixe à la coiffe → production de la 1re protéine</p></li><li><p class="">Peu de production pour la 2e sans IRES</p></li><li><p class="">Ajout d’un IRES entre les deux → production de la 2e protéine</p></li></ul></li><li><p class="">En modifiant la sous-unité 40S pour <strong>empêcher la fixation à la coiffe</strong> :</p><ul><li><p class="">Plus de production du tout</p></li><li><p class="">Ajout d’un IRES → production uniquement de la 2e protéine<br>→ Preuve d’une <strong>entrée interne indépendante de la coiffe et du scanning</strong></p></li></ul></li></ul><p></p>
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Qu’est-ce qu’un IRES ?

  • Structure repliée de l’ARN

  • Permet le recrutement direct de la 40S ribosomale

  • Ce n’est pas une séquence spécifique, mais une structure tridimensionnelle

  • Il existe de nombreux types d’IRES, sans similarité de séquence

  • Structure essentielle dans les vecteurs viraux pour exprimer plusieurs protéines simultanément

29
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Quel est le rôle de l’IRES dans les Picornaviridae ?

  • Permet la liaison directe de la 40S

  • Ne nécessite pas la protéine eIF4E (qui reconnaît la coiffe)

  • Recrutement facilité par les protéines cellulaires eIF4G et eIF3 qui reconnaissent IRES

  • Recrutement ribosomes qui scanne jusqu’au codon d’initiation

30
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Quel est l’avantage du virus de la polio avec l’IRES ?

  • Le virus clive la protéine eIF4G

  • Cela bloque la traduction des ARNm cellulaires où la protéine EiF4G est indispensable au recrutement des ribosomes

  • Mais l’IRES peut toujours recruter la 40S → traduction virale privilégiée

31
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Quand commence la réplication chez les Picornaviridae ?

Après la traduction de la polyprotéine

Celle-ci est clivée pour former :

  • Des protéines de structures

  • Des protéines nécessaires à la réplication

32
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Quels éléments structuraux de l’ARN viral sont essentiels à la réplication ?

  • Repliements en trèfle → fixation de l’ARN polymérase

  • Élément CRE (cis-acting RNA element) :

    • Repliement ARN spécifique

    • Liaison à la propolymérase 3CD et à la polymérase 3D

    • Recrutement de VPg

  • Noeud en 3’

    • Aide à la circulation de l’ARN pour initier la replication

<ul><li><p class=""><strong>Repliements en trèfle</strong> → fixation de l’ARN polymérase</p></li><li><p class=""><strong>Élément CRE (cis-acting RNA element)</strong> :</p><ul><li><p class="">Repliement ARN spécifique</p></li><li><p class="">Liaison à la <strong>propolymérase 3CD</strong> et à la <strong>polymérase 3D</strong></p></li><li><p class="">Recrutement de <strong>VPg</strong></p></li></ul></li><li><p class="">Noeud en 3’</p><ul><li><p class="">Aide à la circulation de l’ARN pour initier la replication</p></li></ul></li></ul><p></p>
33
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Quel est le rôle du VPg dans la réplication ?

  • Il sert d’amorce

  • Il est uridyllé → reconnaît une séquence d’AA au niveau de CRE

  • Cette séquence UU peut aussi reconnaitre la queue polyA

  • Permet la synthèse du brin ARN - à partir de cette queue

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Comment est produite la nouvelle ARN+ chez les Picornaviridae ?

  • Le brin ARN - sert de matrice

  • VPg sert à amorcer la synthèse du nouveau brin positif

  • Ce brin pourra être :

    • Encapsidé comme génome

    • Ou traduit comme ARN messager

35
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Quelles protéines cellulaires et virales initient la réplication de l’ARN viral des Picornaviridae ?

  • PCbp (protéine cellulaire) : se fixe à la boucle en trèfle de l’ARN viral

  • Recrute 3AB : domaine hydrophobe s’ancrant à une membrane issue du RE (vésicules d’autophagie)

  • Ce complexe stabilise le site de traduction et amorce la réplication

<ul><li><p class=""><strong>PCbp</strong> (protéine cellulaire) : se fixe à la boucle en trèfle de l’ARN viral</p></li><li><p class="">Recrute <strong>3AB</strong> : domaine hydrophobe s’ancrant à une membrane issue du RE (vésicules d’autophagie)</p></li><li><p class="">Ce complexe stabilise le site de <strong>traduction</strong> et amorce la <strong>réplication</strong></p></li></ul><p></p>
36
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Quel est le rôle de la protéine 3CDpro dans la réplication ?

  • Se fixe aussi à la boucle trèfle de l’ARN

  • Recrute PABP (protéine cellulaire liant la polyA)

  • PABP rapproche l’extrémité 3’ (polyA) de l’extrémité 5’ → circularisation de l’ARN

  • Permet le recrutement de VPg

37
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Quel est le rôle du repliement CRE dans la réplication ?

  • Permet à 3CDpro de recruter 3Dpol (ARN polymérase)

  • Ce site contient une séquence AA reconnue par VPg

  • 3Dpol synthétise un court di-nucléotide UU → amorçage de la polymérase

38
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Comment VPg devient-il apte à amorcer la synthèse du brin ARN- ?

  • VPg est uridylilé au niveau du CRE (repliement cis-acting)

  • Cette uridylation permet à VPg de se lier à la queue polyA

<ul><li><p class="">VPg est <strong>uridylilé</strong> au niveau du CRE (repliement cis-acting)</p></li><li><p class="">Cette uridylation permet à VPg de se <strong>lier à la queue polyA</strong></p></li></ul><p></p>
39
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À quoi sert la queue polyA pendant la réplication ?

  • Sert de matrice à partir de laquelle la polymérase initie la synthèse du brin ARN-

  • VPg-UU se lie à la queue polyA → amorce la synthèse du brin complémentaire

40
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Quelles protéines virales de la région P3 participent à cette réplication ?

  • 3AB : ancrage membranaire

  • 3CDpro : clivage des polyprotéines + recrutement de 3Dpol

  • 3Dpol : polymérase ARN-dépendante

  • VPg : amorce uridylilée

41
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Comment s’effectue la synthèse du brin ARN- ?

  • VPg uridylilé (VPg-pUpU) se fixe à la queue polyA

  • 3Dpol commence l’élongation à partir de ce site

  • Le brin ARN- est synthétisé complètement complémentaire au brin + initial

42
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Quels rôles ont les protéines cellulaires dans la réplication virale ?

  • Permettent l’ancrage de l’ARN virales sur des membranes endosomiales

  • Participent à l’organisation des complexes de réplications

43
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Pourquoi les ARN viraux ne sont-ils pas copiés comme les ARNm cellulaires ?

  • Les ARNm cellulaires n’ont pas les structures de repliement spécifiques (CRE, trèfles)

  • Ces structures sont essentielles à la fixation de l’ARN polymérase virale

44
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Où se fait la réplication des Picornaviridae ?

  • À la surface de vésicules issues de l’autophagie

  • Le virus induit l’autophagie pour créer un microenvironnement favorable

  • Ces vésicules permettent de concentrer les facteurs de réplication

45
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Comment prouve-t-on que le virus induit l’autophagie pour sa réplication ?

Observation par microscopie :

  • Cellules HeLa infectées par poliovirus → plus de vésicules

  • Ces vésicules ne sont pas présentes dans des cellules non infectées

46
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Quel est l’avantage de cette stratégie ?

  • Concentration de l’ARN polymérase uniquement sur les génomes viraux

  • Évite la copie d’ARNm cellulaires

47
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Quels autres virus utilisent une réplication similaire à celle des Picornaviridae ?

Calciviridae

48
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Comment fonctionne la traduction chez les Togaviridae ?

  • Génome avec coiffe + queue polyA

  • Traduction démarre par reconnaissance de la coiffe (eIF4E)

  • Le ribosome 40S commence le scanning

  • Initiation non classique : grâce à une structure appelée DLP (au lieu de AUG)

49
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Comment se déroule le cycle des Togaviridae ?

Comment se déroule le cycle des Togaviridae ?

  1. Entrée par fusion avec un endosome (virus enveloppé)

  2. Libération de l’ARN+ → traduction directe

  3. Traduction de la polymérase virale

  4. Synthèse d’un ARN- anti-génomique

  5. Production de :

    • ARN+ complets (nouveaux génomes ou pour la polymérase)

    • ARN+ subgénomiques (protéines de structure)

<p><strong>Comment se déroule le cycle des Togaviridae ?</strong></p><ol><li><p class=""><strong>Entrée par fusion</strong> avec un endosome (virus enveloppé)</p></li><li><p class="">Libération de l’ARN+ → <strong>traduction directe</strong></p></li><li><p class="">Traduction de la <strong>polymérase virale</strong></p></li><li><p class="">Synthèse d’un <strong>ARN- anti-génomique</strong></p></li><li><p class="">Production de :</p><ul><li><p class=""><strong>ARN+ complets</strong> (nouveaux génomes ou pour la polymérase)</p></li><li><p class=""><strong>ARN+ subgénomiques</strong> (protéines de structure)</p></li></ul></li></ol><p></p>
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Comment le génome des Togaviridae code-t-il deux types de protéines ?

  • Une polyprotéine non structurale (ARN polymérase)

  • Une polyprotéine structurale (capside, glycoprotéines)

51
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Quel est le rôle du codon STOP chez les Togaviridae ?

  • Coupe la traduction de la polyprotéine non structurale (donc traduit juste l’ARN polymérase et les protéines accessoires nécessaires à la traduction)

  • Permet ensuite la production d’un ARN+ plus court

  • Cet ARNm est coiffé → traduit en protéines de structure

<ul><li><p class="">Coupe la traduction de la polyprotéine non structurale (donc traduit juste l’ARN polymérase et les protéines accessoires nécessaires à la traduction)</p></li><li><p class="">Permet ensuite la <strong>production d’un ARN+ plus court</strong></p></li><li><p class="">Cet ARNm est <strong>coiffé</strong> → traduit en protéines de structure</p></li></ul><p></p>
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Comment se déroule la réplication chez les Coronaviridae ?

  • Le plus grand génome ARN connu

  • Après entrée : traduction de la polymérase

  • Synthèse d’un brin ARN- anti-génomique

  • Production à partir de ce brin de plusieurs ARNm subgénomiques

  • Ces ARNm codent pour différentes protéines structurales (dont la capside)

53
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Les virus à ARN– peuvent-ils être directement traduits à leur entrée dans la cellule ?

  • Non

  • l’ARN ne peut pas être reconnu par les ribosomes

  • Il faut d’abord produire un ARN + grâce à une ARN polymérase virale

<ul><li><p>Non</p></li><li><p>l’ARN ne peut pas être reconnu par les ribosomes</p></li><li><p>Il faut d’abord produire un ARN + grâce à une ARN polymérase virale</p></li></ul><p></p>
54
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Quels types d’ARN+ sont produits par les virus ARN– ?

  • ARN + anti-génomique : sert de matrice pour répliquer le génome

  • ARNm subgénomique : traduit par les ribosomes cellules pour produire les protéines virales

  • Ces deux types d’ARN sont produits par l’ARN polymérase virale

55
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Quels virus ARN– infectent l’Homme ?

  • Non segmentés

    • Paramyxovirdae (rougeoles, oreillons)

    • Filoviridae (Ebola)

    • Rhabdoviridae (Rage transmis du renard à l’homme)

  • Segmentés

    • Orthomyxoviridae (Influenza)

    • Bunyaviridae (hantavirus) présents en Belgique peut provoquer des problèmes rénaux

    • Arenaviridae (Lassa virus), ne sont pas présents en Belgique, responsables de fièvres hémorragiques

  • Autre cas :

    • HDV (Hépatite D), virus satellite

56
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Quelle est la particularité commune à tous les virus de la classe 5 ?

  • Ils contiennent une ARN polymérase virale dans le virion

  • Pour les virus segmentés, chaque segment est accroché à la polymérase

  • Tous ont une forme hélicoïdale

  • Le génome est étroitement associé à des nucléoprotéines (NP ou N)

57
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Quelle exception existe parmi les virus ARN– ?

HDV (Hépatite D) :

  • N’emmène pas sa propre polymérase

  • Utilise la polymérase cellulaire

  • Virus satellite, dépendant du virus de l’Hépatite B (classe 7)

58
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Pourquoi les ARNm subgénomiques des virus ARN– sont-ils plus courts que le génome ?

  • Ils doivent avoir une coiffe et queue polyA

  • Ils servent à être traduits, pas à répliquer le génome

  • On ne peut pas répliquer le génome à partir de ces ARNm

59
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🦠 Rhabdoviridae (rage)

Comment fonctionne la transcription du génome ARN– des Rhabdoviridae ?

  • Le brin ARN– est transcrit en plusieurs petits ARNm

  • Chaque ARNm est monocistronique (code une ou deux protéines)

  • Chaque ARNm est doté :

    • D’une coiffe en 5’

    • D’une queue polyA en 3’

      → Similaire au paramyxoviridae

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🦠 Rhabdoviridae (rage)

Ces ARNm permettent-ils la réplication du génome ?

Non, ils servent uniquement à la traduction des protéines

Pour la réplication du génome, un brin ARN + complet est produit comme matrice

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🦠 Rhabdoviridae (rage)

Qu’est-ce qui déclenche le passage de la transcription à la réplication ?

  • L’accumulation de protéines N

  • Une concentration suffisante en N bloque la transcription segmentaire

  • La polymérase commence alors à produire un brin ARN + complet

62
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🦠 Rhabdoviridae (rage)

Comment fonctionne la polymérase virale pendant la transcription ?

  • Elle démarre au début du génome ARN-

  • Elle transcrit un segment d’ARNm

  • Elle s’arrête à une séquence intergénomique pour

    • Ajouter une queue polyA

    • Puis redémarrer une nouvelle protéine

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🦠 Rhabdoviridae (rage)

Quelle est la première protéine traduite chez les Rhabdoviridae ?

  • La protéine N

  • Son accumulation régule le switch transcription / régulation

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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Quelle est la particularité des Orthomyxoviridae parmi les virus ARN– ?

  • Ce sont des virus segmentés

  • Leur réplication se déroule dans le noyau (exception)

65
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Comment les segments viraux pénètrent-ils dans le noyau ?

  • Grâce à un signal de localisation nucléaire (NLS)

→ Ce signal est porté par les nucléoprotéines (NP) associés à chaque segment

66
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Que produit chaque segment viral dans le noyau ?

  • Un ARNm - coiffé et polyadénylé.

  • Un ARN + anti-génomique servant de matrice pour répliquer le génome qui finira par sortir du noyau pour être encapsidé

Pour rappel, chaque segment est attaché avec son complexe RNA polymérase

67
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Où a lieu la traduction des protéines virales influenza ?

Dans le cytoplasme

68
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Comment la polymérase virale ajoute-t-elle un primer à un ARN+ viral ?

Par cap snatching

  • Elle a une activité endonucléase et clive l’extrémité 5’ d’un ARNm cellulaire = coiffe (10-13 nucléotides terminaux)

  • Cette coiffe est utilisée comme primer pour initier la transcription virale

  • Tous les ARNm du virus de la grippe ont une petite portion d’ARNm cellulaire

69
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Pourquoi les ARNm viraux(ARN+) influenza sont-ils plus courts que le génome ?

  • Ils sont tronqués d’environ 20 nucléotides en 3’ par rapport à l’ARN - d’origine alors que la queue polyA est bien transcrite

  • Un autre ARN + est nécessaire pour la réplication complète

70
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Comment la concentration en NP influence-t-elle la réplication ?

NP élevé (stabilise le brin)→ Permet la transcription de l’ARN complet (anti-génomique)

Ce brin complètement sert à produire une nouveau génome ARN-

71
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🧬 Orthomyxoviridae (Influenza)

Un segment influenza code-t-il toujours une seule protéine ?

La plupart : oui

Certains segments : deux protéines par épissage alternatif

72
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Virus à génome ambisens (Bunyaviridae, Arenaviridae)

Qu’est-ce qu’un génome ambisens ?

ARN simple brin qui code dans les deux sens de lecture

→ Un gène en orientation + , l’autre en orientation -

73
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Virus à génome ambisens (Bunyaviridae, Arenaviridae)

Quels virus humains ont un génome ambisens ?

  • Arenaviridae (ex. Lassa virus : 2 segments)

  • Bunyaviridae (ex. Phlébovirus : 3 segments)

74
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Virus à génome ambisens (Bunyaviridae, Arenaviridae)

Pourquoi ces virus doivent-ils contenir une ARN polymérase virale ?

  • Le génome ne peut pas être directement traduits car ils ne peuvent pas s’accrocher aux ribosomes

  • Il faut donc que l’ADN polymérase se trouve dans le virion

75
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Virus à génome ambisens (Arenaviridae)

Que code chaque segment chez le Lassa virus (Arenaviridae) ?

  • Segment S (Small-sens)

    • Une glycoprotéine précurseur (GP)

    • Une nucléoprotéine

  • Segment L (Large - antisens)

    • Une protéine Z (liaison au zinc, agit comme une protéine matrice)

    • Une protéine L (ARN polymérase virale)

76
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Virus à génome ambisens (Arenaviridae)

Comment sont séparés les deux gènes sur chaque segment ?

Par une région intergénomique en forme d’épinglette à cheveux

77
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Quelle est la première étape de réplication des Arenaviridae ?

  • Transcription et traduction des gènes à orientation négative (NP et L)

  • Les ARNm produits ont une coiffe mais pas de queue polyA

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Que permet l’accumulation de la protéine NP ?

  • Formation d’un brin ARN anti-génomique

  • Ce brin permet la transcription des gènes à orientation positive (GP et Z)

<ul><li><p>Formation d’un brin ARN anti-génomique</p></li><li><p>Ce brin permet la transcription des gènes à orientation positive (GP et Z)</p></li></ul><p></p>
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Que deviennent les ARNm issus du brin anti-génomique ?

Ils sont traduits en protéines de structure, notamment de capside

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Quelles familles virales appartiennent à la classe 3 ?

  • Reoviridae (ex : rotavirus → gastroentérites)

  • Seadonavirus (→ encéphalites en Asie du Sud-Est)

  • Coltivirus (→ fièvre à tiques au Colorado, transmis par tiques et moustiques)

81
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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Quelle est la structure du génome des virus de la classe 3 ?

  • Génome composé de plusieurs segments d’ARN double brin

    • Un brin ARN+

    • Un brin ARN–

  • Chaque segment code pour une protéine

82
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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Les brins ARN+ des virus dsRNA peuvent-ils être directement traduits ?

  • Non

  • Bien qu’ils soient en polarité +, ils ne sont pas accessibles aux ribosomes

  • La traduction commence uniquement à partir des ARNm produits dans la capside

83
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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Que contiennent les virions des virus de la classe 3 pour permettre la transcription ?

  • Une ARN polymérase virale

  • Présente dans le virion, une par segment

84
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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Quelle est la particularité structurale du rotavirus (Reoviridae) ?

  • Il possède de nombreuses protéines de capside

  • Ces protéines forment plusieurs couches de protection autour du génome

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Comment les Reoviridae entrent-ils dans la cellule ?

  • Par endocytose

  • Le virus est d’abord partiellement dégradé dans les endosomes

  • Mais la capside n’est jamais complètement détruite avant d’arriver dans le cytoplasme

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Dans quel état la capside virale reste-t-elle dans le cytoplasme ?

  • Elle reste partiellement intacte

  • La transcription de l’ARNm se fait à l’intérieur de cette capside

87
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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

À partir de quel brin est transcrit l’ARNm chez les Reoviridae ?

Toujours à partir du brin ARN–

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Quel est le type de réplication des virus à ARN double brin ?

  • Réplication conservative

  • Le brin ARN– sert à produire :

    • Des ARNm viraux

    • Des nouveaux brins ARN+

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Comment les ARNm viraux sont-ils exportés vers le cytoplasme ?

  • Ils sortent de la capside par des pores

  • Une fois dans le cytoplasme, ils sont traduits en :

    • ARN polymérase virale

    • Protéines de capside

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Comment se forme un nouveau génome dsRNA ?

  • Quand une capside est en formation, un brin ARN+ y pénètre

  • Une ARN polymérase virale forme alors le brin ARN– complémentaire

  • Cela crée un nouveau segment double brin

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Virus de la classe 3 : ARN double brin (dsRNA)

Où se passent la transcription et la réplication chez les Reoviridae ?

  • À l’intérieur de la capside virale

  • → C’est une caractéristique unique de ces virus