preparação de amostras

Porque é necessário tratar biofluidos antes da análise?

Devido ao elevado teor de proteínas e interferentes.

Porque as proteínas são removidas das amostras?

Porque interferem na análise.

Porque as proteínas podem danificar equipamentos analíticos?

Porque podem precipitar e contaminar colunas.

Qual a técnica mais comum para remover proteínas?

Precipitação de proteínas.

Qual a eficiência típica da precipitação de proteínas?

90–98%.

Qual o objetivo principal da precipitação de proteínas?

Reduzir a solubilidade das proteínas.

O que acontece quando a solubilidade das proteínas diminui?

Precipitam.

O que provoca a desnaturação das proteínas?

Solventes orgânicos, ácidos, sais ou iões metálicos.

Que solventes orgânicos são usados na precipitação de proteínas?

Metanol, acetonitrilo e etanol.

Que ácidos são usados na precipitação de proteínas?

Ácido tricloroacético, perclórico e tungsténico.

Que iões metálicos podem precipitar proteínas?

Zinco, cobre e níquel.

Qual o sal frequentemente usado na precipitação de proteínas?

Sulfato de amónio.

Como podem ser removidas proteínas precipitadas?

Centrifugação ou filtração.

Qual o método mais eficiente para remover proteínas precipitadas?

Centrifugação.

Que força centrífuga é normalmente utilizada?

10000–15000 g.

Porque pequenos tubos facilitam a centrifugação?

Permitem atingir elevadas forças centrífugas.

O que é obtido após centrifugação?

Sobrenadante purificado.

Que tipo de filtros são usados na filtração?

Filtros de membrana polimérica.

O que significa MWCO?

Molecular Weight Cut

O que representa o MWCO?

A menor massa molar 90% retida pela membrana.

O que é a LLE?

Extração Líquido

Qual o objetivo da LLE?

Transferir o analito para um solvente orgânico.

Onde permanecem a maioria dos interferentes na LLE?

Na fase aquosa.

De que depende a eficiência da LLE?

Da afinidade do analito pelas duas fases.

Que analitos são mais facilmente extraídos por LLE?

Os mais lipofílicos.

Porque substâncias iónicas não são adequadas para LLE?

Porque são pouco solúveis em solventes orgânicos.

Que regra orienta a escolha do solvente na LLE?

Semelhante dissolve semelhante.

Que solvente é adequado para analitos apolares?

Hexano.

Que solventes são adequados para compostos de polaridade intermédia?

Acetato de etilo ou diclorometano.

Que característica deve ter o solvente de extração?

Baixo ponto de ebulição.

Porque o solvente deve ser imiscível com a água?

Para formar duas fases.

Porque o solvente deve ser menos denso que a água?

Para formar uma camada superior.

O que descreve a distribuição do analito entre as fases?

Coeficiente de partição.

O que significa um K elevado?

Maior afinidade pela fase orgânica.

O que aumenta a eficiência da extração?

Maior volume de solvente.

O que é mais eficiente?

Várias extrações com pouco solvente.

O que pode resultar de agitação muito vigorosa?

Formação de emulsões.

O que é utilizado para misturar vigorosamente?

Vortex.

Como se separa a fase orgânica após a extração?

Pipetagem ou decantação.

O que pode ser feito após recolher a fase orgânica?

Evaporação do solvente.

Porque se adiciona NaOH na extração de MDMA?

Para converter a MDMA em forma não ionizada.

Porque a forma não ionizada é preferida?

Porque é mais solúvel no solvente orgânico.

O que faz o aumento do pH numa amina básica?

Promove a desprotonação.

O que acontece à polaridade após desprotonação?

Diminui.

O que é SPE?

Extração em Fase Sólida.

Onde é retido o analito na SPE?

Na fase estacionária.

Qual o primeiro passo da SPE?

Condicionamento.

Qual o segundo passo da SPE?

Introdução da amostra.

Qual o terceiro passo da SPE?

Lavagem.

Qual o quarto passo da SPE?

Eluição.

Qual o objetivo do condicionamento?

Ativar a fase estacionária.

Qual o objetivo da lavagem?

Remover interferentes.

O que acontece ao analito durante a lavagem?

Mantém

Qual o objetivo da eluição?

Recuperar o analito.

O solvente de eluição deve ter que força eluente?

Elevada.

O solvente de lavagem deve ter que força eluente?

Baixa ou moderada.

Que materiais podem constituir a fase estacionária?

Sílica, alumina ou polímeros.

Que tipo de interações retêm o analito na SPE?

Polares, apolares, Van der Waals ou troca iónica.

Porque a amostra é frequentemente diluída antes da SPE?

Para melhorar a retenção.

Porque se lava a coluna SPE?

Para remover interferentes coadsorvidos.

O que é SPME?

Microextração em Fase Sólida.

Em que consiste a SPME?

Adsorção do analito numa fibra revestida.

Que vantagem apresenta a SPME?

Baixo consumo de amostra e solventes.

Como é recuperado o analito na SPME?

Por desadsorção térmica ou com solvente.

O que é derivatização?

Modificação química do analito.

Qual o objetivo da derivatização?

Tornar o analito detetável ou separável.

O produto da derivatização chama

se?

Que propriedades podem mudar após derivatização?

Solubilidade, volatilidade ou retenção.

Porque se derivatiza a acrilamida?

Para facilitar a análise cromatográfica.

O derivado pode apresentar que alteração cromatográfica?

Maior tempo de retenção.

O que significa DAS?

Dilute and Shoot.

Em que consiste o DAS?

Diluição simples da amostra.

O DAS remove interferentes?

Não.

O que acontece à concentração dos interferentes no DAS?

Diminui.

O que acontece à concentração do analito no DAS?

Também diminui.

Quando é adequado usar DAS?

Quando o equipamento é muito sensível e seletivo.

Qual a principal vantagem do DAS?

Rapidez e baixo custo.

Que tipo de amostra é frequentemente preparada por DAS?

Urina.

Porque o plasma não é adequado para DAS simples?

Possui demasiadas proteínas.

Qual o principal objetivo da diluição no DAS?

Reduzir os efeitos de matriz e proteger o equipamento analítico.