mico fungos

Identifica a levedura pelos resultados nas provas de identificação:

Prova dos clamidosporos: +

Prova da filamentaçao: +

Prova dos ascosporos: -

Prova da urease: -

Prova da fenoloxidase: -

Sensibilidade à cicloheximida: + ( não é sensível é resistente, cresce)

Cor no meio de chromagar Cândida: azul esverdeado

Cândida albicans

Identifica a levedura pelos resultados nas provas de identificação:

Prova dos clamidosporos: -

Prova da filamentaçao: -

Prova dos ascosporos: -

Prova da urease: -

Prova da fenoloxidase: -

Sensibilidade à cicloheximida: - ( é sensível, n cresce)

Cor no meio de chromagar Cândida: rosa

Aspeto macroscopico: bordos franqueados, textura seca e rugosa, com topografia plana

Cândida krusei

Identifica a levedura pelos resultados nas provas de identificação:

Prova dos clamidosporos: -

Prova da filamentaçao: -

Prova dos ascosporos: -

Prova da urease: -

Prova da fenoloxidase: -

Sensibilidade à cicloheximida: -

Cor no meio de chromagar Cândida: rosa

Análise macroscopica: aspeto cremoso com cor branca creme e com bordos regulares, normalmente com colónias pequenas convexas

Cândida glabrata

Distingue se dá krusei porque as suas colonias n são secas com bordos franjeados, são cremosa, com bordos regulares bem definidos com colónias convexas em vez de planas

Identifica a levedura pelos resultados nas provas de identificação:

Prova dos clamidosporos: -

Prova da filamentaçao: -

Prova dos ascosporos: -

Prova da urease: +

Prova da fenoloxidase: +

Sensibilidade à cicloheximida: -

Cor no meio de chromagar Cândida: rosa acinzentado

Análise macroscopica: colónias com aspeto mucóide, convexas com bordos regulares

Cryptococcus neoformans

Aspeto mucóide devido à cápsula, colônia mais ou menos convexa, com cor creme/branca, com bordos regulares bem definidos

Prova de urease positiva pq tem urease pré feita, a prova da se em menos de 4 horas

Prova de fenoloxidase dá positivo pq é capaz de transformar a fenoloxidase em melanina

Identifica a levedura pelos resultados nas provas de identificação:

Prova dos clamidosporos: -

Prova da filamentaçao: -

Prova dos ascosporos: +

Prova da urease: -

Prova da fenoloxidase: -

Sensibilidade à cicloheximida: -

Cor no meio de chromagar Cândida: rosa acinzentado

Análise macroscopica: colónias brancas creme cónicas, com bordos regulares

Saccharomyces cerevisiae

Produz ascos com ascosporos por reprodução sexuada, quando as condições nutritivas são desfavoráveis, daí haver um meio específico que incentiva a produção destes.

Topografia conica, colônia brancas/creme, com bordos regulares e bem definidos, com textura cremosa

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

É um fungo filamentoso inferior, porque n apresenta hifas regularmente separadas e porque os seus esporos são internos em esporângios, obtidos por reprodução assexuada. Por reprodução sexuada produz zigosporos

Mucor spp.

Esporângio redondo e grande

Columela pode estar em forma de dedinhos (projeções apicais) ou redonda

Quando o esporangio rebenta deixa um colarete, por estrangulamento.

Os esporangioforos são ramificados, longos e lineares

N tem rizoides.

Pode ter clamidósporos.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

É um fungo filamentoso inferior

Rizopus spp.

Apresenta rizoides no terminal dos esporangioforos.

Os esporangioforos n tem ramificações

A columela tem forma de guarda chuva

Esporangio esférico

Apresenta numerosos estolhos

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Fungo filamentoso inferior

Syncephalastrum spp.

Em vez de uma columela apresenta uma vesícula rugosa onde estão inseridas esporangios colunares, o merosporangio, que contem merosporangiosporos.

Hifas longas, largas com ramificações curtas.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Fungo filamentoso inferior

Lichteimia/ Absidia spp.

Esporangioforo pequeno, periforme, ramificado.

A apófise é em forma de funil.

A columela é cónica

Há formação de colarete

Rizoides no meio do esporangioforo (intermodais), mais poucos e dificeis de ver.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Aspergillus terreus

Fungo filamentoso superior

Conidiogénese enteroblastica fialidica (formação de fialoconidios, com esporos nas fialides, formando cadeias basiptas de conidios, esporo + jovem na base da cadeia)

Distribuição colunar das fialides e metulas

É bisseriado, apresenta metulas e rizoides ligadas à vesícula

Pode apresentar clamidosporos ao longo das hifas, na lateral.

Vesícula em forma de cúpula, abertura progressiva.

Conidioforo longo e tortuoso

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Aspergillus Niger

Fungo filamentoso superior

Conidiogénese enteroblastica fialidica

Apresenta os conidios negros e rugosos.

Tem distribuição Radial das metulas e fialides

É bisseriado

Vesícula grande e esférica

Conidioforo longo, linear e liso com abertura abrupta para a vesícula.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Aspergillus fumigatus

Fungo filamentoso superior

Conidiogénese enteroblastica fialidica

É unisseriado

Tem distribuição colunar das metulas e fialides

Abertura progressiva do conidioforo para a vesícula resultando num formato em pera

Conidioforo curto, tortuoso, liso

Colónia verde.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Aspergillus flavus

Colónia verde

Fungo filamentoso superior

Conidiogénese enteroblastica fialidica

Apresenta pleomorfismo

É bisseriado ou unisseriado

Apresenta distribuição Radial ou colunar

Tem as paredes do conidioforo rugosas ( com pontilhados), curto com abertura abrupta para a vesícula.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Alternaria spp

Conidiogénese holobástica acrópeta (conidios resultam uns dos outros por gemulação, formando uma cadeia acropta de conidio, onde o conidio + jovem está no topo da cadeia)- poroconidios de grandes dimensões podendo ramificar, têm divisões parietais.

Micelio mielinizado (melanina confere resistência).

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Fusarium spp

Conidogénese enteroblastica fialidica (failoconidios podem agregar-se à volt da célula conidiogenica formando cabeças devido a uma substância muciaginosa)

Apresenta macoconídeos e microconideos (curvtura em banana)

Apresenta monifialides (inseridas diretamente no micelo vegetativo)

Polifiálides: a fialide tem vários pontos de saída de conidios

Pode ter clamidósporos nas hifas, intercalares ou terminais.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Geotrichum

Conidiogénese tálica ártrica- holoártrica (fragmentação sucessiva da hifa numa serie de conidios, todos os fragmentos da hifa são férteis)- artroconidios (retângulos que vão arredondando)

Podem gerar geotricose- infeções digestivas ou respiratórias raras.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Scopulariopsis spp.

Conidiogénese enteroblástica anelidica (primeiro conidio rompe a parede celular da célula conidiogénica na base formando uma cicatriz, por onde vai emergir o próximo conídio, gerando várias cicatrizes suscessivas, tipo gargal de garrafa)

Conidios trunados na base devido ao anel de cicatrização e é rugoso com parede espessa

Retem muito o corante azul de lactofenol.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Clasdosporium spp.

Micélio melanizado-

Conidiogénese holoblástica acrópeta (resultam uns dos outros por genulação- cadeias acropetas de conidios)

Conidios de menores dimensões que na alternaria spp. que podem ramificar em aspeto de arbusto, morfologia típica.

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Microsporum /Nazária spp.

Conidiogenese tálica solitária (extremidade da hifa dilata e forma um septo que se converte um conidio isolado- aleuroconidios- transfromação da hifa em conidios)

Apresenta macroconidios com extremidde pontiaguda com parede espessa e rugosa

Apresenta microconidios diretamente inseridos nas hifas

Indica:

Se é fungo filamentoso inferior ou superior

O gênero do fungo

Características que o distingue

Penicilium spp.

Conidiogénese enteroblástica fialidica (esporo + jovem na base)

Célula-pé

conidioforo (estrutura de reprodução assexuada)

Vesícula, métulas (forma de jarra), fialides

As fialides podem ser monoverticaladas (condifioforo+ fialides), biverticaladas (conidioforo+ métulas+ fialides), triverticaladas (conidioforo+ ramos + métulas+ fiálides).

Prova dos clamidósporos:

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: Corn meal agar com tween 80 (meio pobre)

Incubação: 22-25ºC, 2-3 dias

O tween 80 e a menor tensão de O2, devido a semear em profundidade no agar, à lâmina em cima da preparação e ao parafilme com o qual fechamos o meio, favorecem/induzem a produção de hifas, pseudohifas e clamidósporos, além dos blastosporos. O CO2 tem uma percentagem de 10-15%.

Clamidósporos são esporos de resistência, deve-se a um espessamento da parede celular das leveduras, daí serem bolas com parede dupla, muito espessa no terminal das hifas.

IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA: C. ALBICANS

Prova dos ascósporos:

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: meio de acetato de potássio em tubo/rampa.

Incubação: 22-25ºC, 3 dias, cuidado o controlo positivo é que vai coordenar o tempo de incubação, se o controlo já estiver positivo e o teste não, tiramos de incubar.

Positiva em leveduras Ascomicéticas: não permite identificação presentiva da S. cerevisiae, só saber que aquela levedura à ascomicética e pode por exemplo ser uma S. cerevisiae (n podemos dizer que é presuntivamente ela)

No microscopio:

• ascos: vermelho

• Bastosporos: azul

Tanto a presença de acetato de potássio com a menor concentração de glucose, 1g/l, favorecem/ induzem o ciclo sexuado, com produção de ascos com ascosporos, em prol do ciclo vegetativo (a menor concentração de glucose inibe as formas vegetativas). É realizada estria à superficie do meio em tubo.

Prova da fenoloxidase:

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: Meio de corn meal agar com ácido cafeico

Incubação: 25ºC, 2 dias

Usa-se um meio com ácido cafeico, pq se a levedura tiver a enzima fenoloxidase, vai reagir com ele originando compostos melánicos (melanina), difundindo a cor castanha para o meio.

IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA: CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS

Prova da filamentação:

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: suspensão da cultura em soro bovino fetal ou humano ou de cavalo ou NYP. (liquido, faz se suspensão)

Incubação: 2-3h a 37ºC (fator diferencial)

SEMPRE EM EPPENDORF, n é preciso técnica assética (suspender com pipeta a cultura com pipeta pq esteve congelado e depois fazer exame a fresco)

Se deixarmos mais tempo (4 h) outras candidas podem produzir tubos germinativos, hifas e pseudohifas. Não se deve fazer uma suspensão muito densa (evitar aspeto leitoso).

NYP: N-acetil-glucosamina; prolina; yeast nitrogen base; NaCl, pH 6,7

IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA: C. ALBICANS.

Prova do urease:

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: meio de ureia liquido

Incubação: 22-25ºC, observação após 4 horas e reincubar por 3 dias.

A rhodotorula e o trichosporon tbm dão +.

O crytococcus neoformans tem a enzima urease pré-formada, o que permite observar um resultado positivo em 4 horas. A urease degrada a ureia em amónia, havendo alcalinização do meio, que permite uma mudança na coloração, passa de amarelo para rosa-choque.

IDENTIFICAÇÃO PRESUNTIVA: CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS

Sensibilidade à cicloheximida

indica o meio, tempo e temperatura de incubação e características especificas relevantes.

Meio: MYC (mycobiotic agar, SAB+ cloranfenicol+ cicloheximida), fazer em SAB em paralelo (é o controlo +)

Incubação: 22-25ºC, 2 dias

Cicloheximida é um anti-fúngico que diferencia as espécies saprófitas das dermatófitas (dermatófitos crescem, saprofitas não). Facilita o isolamento de fungos dermatófitos.

Meio seletivo não diferencial.

Sensibilidade à temperatura

Meio: 2 tubos SAB, com estria à superficie.

Incubação: a 25ºC e a 37ºC em paralelo, 2 dias.

Se crescer a 37ºC não é sensivel à temperatura, teste psotivo.

Teste negativo: n cresce a 37ºC

Qual a diferença entre tubo germinativo, hifa e pseudo-hifa?

Pseudo-hifa: apresenta constrições ao longo do segmento, porque resulta de gemulações sucessivas das células.

Tubo-germinativo: projeção da parede celular de forma paralela, que leva à formação da hifa. Estrutura inicial que dá origem às hifas verdadeiras, que se formam a 37ºC.

Que cuidado e deve ter na preparação do meio de SAB com cloranfenicol?

Pode ser adicionado após a autoclavagem, quando o ágar arrefece para cerca de 44–47 °C, ou é pode ser autoclavado com o meio apenas se o fabricante explicitamente permitir. Também se pode fazer filtração por membrana, que é a forma clássica de esterilizar soluções termossensíveis, sem usar calor.

O cloranfenicol é termoestável, mas pode ser esterilizado por filtração por membrana e adicionado ao meio de Sabouraud após a autoclavagem, quando o ágar estiver arrefecido, para prevenir eventuais perdas na autoclavagem.

Qual a temperatura e tempo comum de esterilização?

121ºC, 15-30 min na autoclave.

Como se faz identificação presentiva?

Na C. albicans, o teste positivo na prova dos clamidósporos e na da filamentação permite identificação presuntiva (fungo dimórfico)

No cryptococcus neoformans a prova da fenoloxidase e da urease.

Nas outras os resultados das provas dão suspeita mas a identificação presuntiva apenas se dá com API.

Como é que se faz uma identificação definitiva?

Apenas se o RNA for sequênciado.

Diferencia fungos inferiores de superiores

Fungos inferiores (mucormicetos/zigomicetos):

Hifa: não é regularmente septada, hialina, maiores e mais largas.

Reprodução assexuada: Esporos internos, em esporangios (os muito azuis são mais jovens, coram mais facilmente).

Reprodução sexuada: Zigósporos

• Mais ivasivos (semeados em tubo para evitar dessiminação de esporos e pq em placa macroscopicamente n é muito util pq o aspeto é muito semelhante, sempre algodoado).

Fungos superiores (ascomicetos):

Hifa: regularmente septada (pode ser hialina ou mielinizada)

Reprodução assexuada: conidios externos originados apartir da hifa (conidiogénese tálica) ou de uma célula conidiogénica (formção de nova estrutura- blástica)

Reprodução sexuada: ascosporos em ascos.

Quais as formas mais apropriadas de repicar uma cultura de fungos filamentosos inferiores?

Técnica de transferência de fragmento de colónia. (para se verem os rizoides)

Quais as formas mais apropriadas de repicar uma cultura de fungos filamentosos superiores?

Técnica da fita cola

Técnica de cultura em lámina (podemos usar meios mais pobres para estimular a produção de ascos como corn meal agar)

Quais são as regras para comparação de culturas por chave dicotómica?

As culturas devem ter sido semeadas no msm meio, igual temperatura, tempo de incubação, iguais condições de incubação.

Distingue as estruturas de frutificação nos diferentes géneros de fungos filamentosos inferiores.

Mucor: A estrutura de frutificação é o esporângio

Rhizopus: esporângio + rizoides

Lichtheimia: esporângio + rizoides pouco nitidos (tem apófise)

Syncephalastrum: merosporângio inserido na vesícula, que produz merosporangiosporos.

Distingue as estruturas de frutificação nos diferentes géneros de fungos filamentosos superiores.

Aspergillus: A estrutura de frutificação é a cabeça aspergilar. Célula conidiogénica dilata formando uma vesícula que pode ou n ter métulas (bisseriado) e tem fiálides, com distribuição que pode ser radial ou colunar.

Penicillium: A estrutura é o conidióforo penicilado, pode ter métulas, n tem vesícula.

Cladosporium: A estrutura é um conidióforo que produz cadeias de conídios muito frágeis e ramificadas, com uma aparência de árvore ou arbusto.

Alternaria: Produz conidióforos simples de onde saem conídios grandes, escuros, com septos horizontais e verticais.

Microsporum (Dermatófito): A estrutura de frutificação diagnóstica são os macroconídios. São estruturas grandes, em forma de fuso ou canoa, com paredes grossas e rugosas, divididas internamente por vários septos (geralmente mais de 5 compartimentos).

Geotrichum: a prórpria hifa é a estutura de frutificação produzindo Artroconidios, como n e forma uma estrutura propriamente dita pode se considerar que n tem

Distingue os diferentes tipo de conidiogénese

tálica- n há formação de novas estruturas, formação de conídios apartir da hifa

• holoartrica- fragmentação sucessiva da hifa e todos os fragmentos são férteis- artroconidio

• enteroartrica- alguns fragmentos n são ferteis

• solitária- forma-se um septo na hifa que individualiza um conidio, originando um macroconidio por dilatação da extremidade da hifa que vai e compartimentar.- aleuroconidio

Blástica- há formação de novas estruturas

• Holoblástica: A membrana externa acompanha sempre o crescimento do conidio

• pode ser acrópta- poroconidio (gemulações sussecessivas aprtir de um conidio inicial), simpodial (um conidio forma-se adjacente ao conidio inicial formando um cacho de conidios.

• Enteroblástica: a membrana externa rompe com a maturação do conidio.

• pode ser fialidica- fialoconidio (formam se cadeias basipetas de conidios onde o conidio mais jovem está na base da cadeia junto à celula conidiogénica em forma de garrafa, sendo que os conidios originam se sempre do msm ponto, onde rompe para sair o mais velho vai emergir o segundo) ou anelidica (os conidios maduros ao sair geram uma cicatriz, o segundo conidio emerge em cima dessa cicatriz, formando um aspeto de gargal, pq formam-se cicatrizes sucessivas e o conidio sai com a base truncada).- aneloconidio