ELISA: Prueba Rápida de Embarazo/Ovulación/ Drogas

ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked

Por ImmunoSorbent Assay,

Ensayo inmunoadsorción ligado a enzimas) es una técnica (inmunoensayo) en la cual un determinado producto (antígeno anticuerpo), inmovilizado en una fase sólida (adsorbido) se detecta mediante un

Anticuerpo unido (conjugado), capaz de generar un cambio de color.

TIPOS DE ELISAS: Determinación de anticuerpos

Indirecto-

Competitivo

Determinación de anticuerpos Indirecto-

Es el método más utilizado para la determinación de anticuerpos, Básicamente, consiste en la inmovilización a la placa de ELISA del antigeno del que queremos conocer si en el suero problema existen anticuerpos especificos

Determinación de anticuerpos Competitivo

-En este sistema también es muy utilizado para la detección de anticuerpos especificos. Se parte de un anticuerpo (monoclonal o policlonal), frente a un antigeno conocido, que previamente ha sido inmovilizado en la placa. Se denomina de competición ya que el suero problema es incubado previamente con el antigeno, antes de incubarlo con. El antisuero fijado en la placa, y por tanto compite con él. Los pasos siguientes es la adición e incubación del conjugado, lavado y amplificación con el sustrato y lectura

TIPOS DE ELISAS: Deteterminación de antigenos

Directo-

sándwich

Múltiple

Deteterminación de antigenos Directo-

las placas de ELISA se preparan recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el antigeno. Se incuban con anticuerpos marcados que indican la presencia de antigeno en la solución analizada

Deteterminación de antigenos sándwich

Ensayo de captura de antigeno y detección mediante inmunocomplejos. Se trata de un ensayo muy empleado en el que se recubre el pocillo con un primer anticuerpo anti-antigeno. Después de lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antigeno, que será retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un segundo lavado que elimina el material no retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo anti-antigeno marcado. Así pues cada molécula de antigeno estará unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al menos, que lo marca.

Deteterminación de antigenos Múltiple

-permite cuantificar varias proteinas diferentes de forma simultánea presentes en una misma muestra mediante un arreglo definido de anticuerpos de captura.

1. Unión del antígeno o del anticuerpo, responsible de atrapar el producto de interés, a la fase sólida.

La unión de anticuerpos o antígenos se realiza con facilidad a la superficie de plásticos tratados que tienen gran afinidad por proteínas. Actualmente como fase sólida se utiliza la microplaca de 96 pocillos de plástico tratado para aumentar su capacidad de adsorción. (fenómeno de superficie) de moléculas y con fondos de pocillo ópticamente claros para poder realizar las medidas de densidad óptica en instrumentos específicos.

Las 4 fases de un ensayo ELISA son las siguientes:

1. Unión del antígeno o del anticuerpo, responsible de atrapar el producto de interés, a la fase sólida.

II. Adición de la muestra que contiene el producto (antígeno o anticuerpo) de interés.

III. Detección del producto de interés en la muestra.

IV. Revelado de la reacción enzimática.

III. Detección del producto de interés en la muestra.

Para esto se realiza previamente la unión (conjugación) de una enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina, etc.) a un anticuerpo. El anticuerpo conjugado a la enzima se emplea en los ensayos de detección directa (conjugado se une o reconoce

Directamente lo que buscamos en la muestra) o detección indirecta (conjugado se une al anticuerpo primario, el cual reconoce lo que buscamos en la muestra).

IV. Revelado de la reacción enzimática.

Después de un lavado para eliminar todas las moléculas marcadas no fijadas en forma de inmunocomplejos se añade el sustrato enzimático en solución. Se deja reaccionar y se lee la densidad óptica (OD) mediante espectrofotometría. Comúnmente se utilizan espectrofotómetros de lectura de placas que han recibido el nombre de lectores ELISA. Los lectores ELISA espectrofotómetros capaces de realizar lecturas seriadas de cada uno de los pocillos de la placa ELISA. A diferencia de un espectrofotómetro convencional, con capacidad de leer todas las longitudes de onda del ultravioleta y el visible de manera continua, los lectores de ELISA disponen de sistemas de filtros que sólo permiten la lectura de una o pocas longitudes de onda. Son la que se corresponden con las necesarias para determinar la densidad óptica de los cromógenos más comúnmente utilizados.

positivo para prueba de embarazo

Color en la línea de prueba (T) es indicativo de presencia de hCG en orina al inicio del embarazo. La intensidd del color puede ser menor que en la línea control (C)

positivo para Prueba de ovulación

Color en la línea de prueba (T) de intensidad igual o mayor que la línea control (C) es indicativo de un alza en la hormona LH, lo cual dispara la ovulación

negativo para Prueba de ovulación

si no hay color en la línea de prueba (T) o si hay uno más claro que la línea control (C).

positivo para Prueba de drogas

Positivo: No color en la línea de prueba (T) es indicativo de presencia de droga en orina, ya que el conjugado al estar unido a la droga en orina no puede unirse al antígeno (droga) inmovilizado.

Los anticuerpos conjugados se encuentran saturados del antígeno presente en la muestra, lo que impide su unión con los antígenos inmovilizados en la línea de prueba (T).

El exceso de Conjugado-droga seguirá migrando hasta quedarse retenido en la línea control donde se encuentran anticuerpos inmovibilados contra Ab conjugado

negativo para Prueba de drogas

Color en la línea de prueba (T) es indicativo de que no hay droga en orina, y el conjugado puede unirse al antígeno (droga) inmovilizado.

Los anticuerpos conjugados se mueven hacia la línea de prueba donde se unen con el antígeno inmovilizado.

El exceso de Ab conjugado seguirá migrando hasta quedarse retenido en la línea control donde se encuentran anticuerpos inmovibilados contra Ab conjugado.

Invalido para Prueba de drogas

No color en la línea control, indicativo de que la prueba no funciona bien.

Qué antígeno detecta la prueba de ovulación?

La prueba de la ovulación detecta la hormona (en exceso) luteinizante humana (LH) en la orina

¿ Cómo debe lucir el resultado de una prueba de ovulación en la que la mujer no está ovulando?

La banda de la tirilla debe lucir más clara (T) o incolova en comparación con la banda (Control) de la prueba

3- ¿Cómo se interpreta el resultado de en una prueba de droga donde aparecen líneas tanto en "T" como en "C"?

El resultado se interpretaría como negativo a la prueba de drogas.