Técnicas de Inmunodiagnóstico: Reacciones Ag-Ac, Inmunoensayos y Laboratorio de Autoinmunidad

Fichas de vocabulario exhaustivas que abarcan los conceptos esenciales de inmunodiagnóstico: bases del sistema inmunitario, detección de autoanticuerpos, organización del laboratorio de autoinmunidad, reacciones secundarias (aglutinación, precipitación, turbidimetría y nefelometría), técnicas en gel y complementarias, e inmunoensayos primarios marcados (ELISA, EMIT, radioinmunoanálisis y fluoroinmunoensayos).

Inmunidad innata

Primera línea de defensa del organismo presente desde el nacimiento, que actúa de forma rápida, general e inespecífica sin necesidad de un reconocimiento antigénico previo.

Inmunidad adaptativa

Respuesta inmunitaria específica y adquirida mediada por linfocitos B y T, caracterizada por su alta precisión y por generar memoria inmunológica ante patógenos concretos.

Células presentadoras de antígeno (CPA)

Células inmunitarias (como las células dendríticas, macrófagos y linfocitos B) que captan, procesan antígenos y los exponen en su membrana acoplados a moléculas del MHC para activar a los linfocitos T.

Linfocitos T CD8+

Linfocitos T citotóxicos que reconocen antígenos extraños presentados por moléculas MHC I y se encargan de eliminar células infectadas o neoplásicas.

Linfocitos T CD4+

Linfocitos T cooperadores o auxiliares que reconocen antígenos asociados a moléculas MHC II y coordinan la respuesta inmunitaria mediante la liberación de diversas citoquinas.

Epítopo

Región o determinante específico situado en la superficie de un antígeno que es reconocida por el parátopo del anticuerpo o el receptor del linfocito.

Parátopo

Zona hipervariable del anticuerpo que se acopla complementaria y específicamente al epítopo del antígeno mediante enlaces no covalentes.

Autoanticuerpos

Inmunoglobulinas sintetizadas por el sistema inmunitario dirigidas erróneamente contra componentes, células o tejidos propios del organismo.

Tolerancia inmunológica

Capacidad funcional del sistema inmunitario para reconocer los componentes propios como no dañinos y abstenerse de iniciar respuestas lesivas contra los tejidos sanos.

Tolerógeno

Antígeno que induce una falta de respuesta inmunológica específica o tolerancia, evitando el desarrollo de una respuesta defensiva.

Inmunógeno

Sustancia o antígeno capaz de desencadenar por sí sola una respuesta inmunitaria humoral o celular en el organismo.

Mimetismo molecular

Homología estructural entre antígenos de patógenos y moléculas propias que induce al sistema inmunitario a reaccionar de forma cruzada y lesionar tejidos del huésped.

Anticuerpos antinucleares (ANA)

Grupo de autoanticuerpos reactivos contra proteínas y ácidos nucleicos del núcleo celular, empleados comúnmente en cribado inicial de enfermedades autoinmunes sistémicas.

Anti-ADNdc (anti-dsADN)

Autoanticuerpos dirigidos contra la doble cadena de ADN, caracterizados por su alta especificidad diagnóstica para el lupus eritematoso sistémico y su valor en el seguimiento de la actividad lesional.

ANCA

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos, asociados habitualmente al diagnóstico de vasculitis sistémicas y enfermedades inflamatorias intestinales.

Espécimen

Muestra biológica obtenida del paciente (como suero, saliva, orina o biopsias) que se procesa en el laboratorio para la detección de analitos o biomarcadores.

Procedimientos Normalizados de Trabajo (PNT)

Documentos protocolizados que detallan de manera secuencial y estricta las pautas técnicas desde la recepción de la muestra hasta el informe de resultados para garantizar calidad y reproducibilidad.

Calibrador (Estándar o Patrón)

Espécimen con una concentración conocida y certificada del analito que se utiliza de forma exclusiva para ajustar, graduar y estandarizar los equipos analíticos.

Muestra de control

Material con un rango de valores previamente tabulado que se analiza de forma rutinaria para contrastar la exactitud y estabilidad del sistema de medida.

Línea celular HEp-2

Células derivadas de carcinoma laríngeo humano que poseen núcleos de gran tamaño y elevada concentración de antígenos, utilizadas como sustrato habitual para detectar ANA mediante IFI.

Interacción primaria Ag-Ac

Unión físico-química inicial a nivel molecular entre un antígeno y su anticuerpo homólogo, la cual no genera una manifestación visible espontánea a simple vista.

Interacción secundaria Ag-Ac

Consecuencia física macroscópica o medible que deriva de la unión molecular previa, manifestándose como aglutinación, precipitación o fijación del complemento.

Aglutinación

Reacción secundaria en la que anticuerpos solubles se unen a antígenos presentes sobre superficies particuladas (bacterias, hematíes o látex) formando cúmulos o redes visibles.

Efecto de zona (o prozona)

Fenómeno analítico consistente en la ausencia de agregados visibles debido a un exceso considerable de anticuerpos frente a la concentración de antígeno, pudiendo provocar falsos negativos.

Poszona

Situación de desbalance producida por un exceso marcado de antígeno que imposibilita la formación de complejos reticulares insolubles y produce mediciones inexactas.

Turbidimetría

Técnica óptica en fase líquida que cuantifica la concentración de inmunocomplejos midiendo la disminución de la intensidad de la luz que atraviesa directamente la muestra (luz transmitida).

Nefelometría

Técnica fotométrica de fase líquida que evalúa inmunocomplejos registrando la luz dispersada por las partículas en suspensión, comúnmente a un ángulo de dispersión de $70^\circ$.

Prueba de Coombs directa

Ensayo de aglutinación que emplea un reactivo con anticuerpos antiinmunoglobulina humana para evidenciar anticuerpos ya adheridos a la membrana de los eritrocitos del paciente.

Técnica de Mancini

Inmunodifusión simple radial cuantitativa en la que el anticuerpo está incorporado en el gel de agar y el antígeno difunde desde pocillos generando anillos de precipitación cuyo diámetro es proporcional a la concentración.

Técnica de Ouchterlony

Inmunodifusión doble cualitativa donde antígeno y anticuerpo difunden simultáneamente por el gel desde pocillos independientes, formando líneas de precipitación en la zona de equivalencia.

Inmunofijación

Técnica analítica que combina la electroforesis en gel para separar proteínas con la precipitación localizada mediante la adición de antisueros monoespecíficos y tinción; se usa para tipificar paraproteínas en mieloma múltiple.

Electroinmunodifusión (Rocket)

Método semicuantitativo en el cual el antígeno migra por la acción de corriente eléctrica a través de un gel con anticuerpo incorporado, formando arcos de precipitación cónicos cuya altura indica la concentración.

Fijación del complemento

Método serológico donde el consumo del complemento sérico por inmunocomplejos específicos impide la posterior lisis de eritrocitos de cordero sensibilizados, indicando la ausencia de hemólisis un resultado positivo.

Western blot

Técnica confirmatoria altamente específica que separa proteínas desnaturalizadas con SDS-PAGE por peso molecular, las transfiere a una membrana de nitrocelulosa y las identifica con anticuerpos marcados.

Inmunoensayo competitivo

Diseño analítico donde el antígeno de la muestra compite con una concentración fija de antígeno marcado por un número limitado de sitios de unión; la señal emitida es inversamente proporcional a la concentración del analito.

Inmunoensayo no competitivo (sándwich)

Formato de alta sensibilidad donde el antígeno se inmoviliza mediante un anticuerpo de captura en fase sólida y se detecta con un segundo anticuerpo marcado hacia un epítopo diferente; la señal es directamente proporcional a la concentración.

Inmunoensayo homogéneo

Método analítico rápido y automatizable en el que la señal generada se mide sin requerir la separación física de las fracciones libres de reactivos y los inmunocomplejos.

Inmunoensayo heterogéneo

Técnica inmunoanalítica que exige pasos intermedios de lavado o centrifugación para separar los reactivos no unidos antes de realizar la lectura de la señal, reduciendo interferencias.

Inmunocromatografía

Ensayo cualitativo de flujo lateral en el que la muestra asciende por capilaridad a lo largo de una tira de nitrocelulosa, generando bandas coloreadas visibles mediante nanopartículas de oro o selenio coloidal.

EMIT

Inmunoensayo enzimático homogéneo y competitivo en el que la unión del anticuerpo al conjugado analito-enzima inactiva la catálisis; a mayor cantidad de analito no marcado en la muestra, mayor actividad enzimática y mayor señal colorimétrica.

ELISA

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de naturaleza heterogénea donde se inmoviliza un reactivo en una placa y se detecta la unión mediante enzimas que transforman un sustrato generando cambios de color medibles por espectrofotometría.

Radioinmunoensayo (RIA)

Técnica competitiva heterogénea que emplea radioisótopos (como $^{125}\text{I}$ o $^3\text{H}$) para marcar reactivos, produciendo una emisión de radiación inversamente proporcional a la cantidad de analito presente.

Ensayo inmunorradiométrico (IRMA)

Inmunoensayo radiactivo no competitivo de tipo sándwich en el cual el antígeno se une a un anticuerpo inmovilizado y a un anticuerpo marcado con radioisótopos en exceso; la señal emitida es directamente proporcional a la concentración del antígeno.

Tecnología xMAP (Luminex)

Plataforma multiplex de microesferas de poliestireno teñidas con proporciones definidas de fluoróforos rojos e infrarrojos que permite identificar y cuantificar hasta 100 analitos de forma simultánea en una sola muestra.

Fluorocromo

Molécula capaz de absorber radiación electromagnética a una determinada longitud de onda excitatoria y emitir luz a una longitud de onda superior, empleada como marcador en inmunoensayos.

Inmunofluorescencia directa (IFD)

Técnica diagnóstica microscópica en la que se utiliza un anticuerpo específico marcado directamente con un fluorocromo para localizar antígenos presentes en células o biopsias tisulares.

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

Método de marcaje en dos etapas en el que un anticuerpo primario no marcado se fija al antígeno diana y posteriormente es reconocido por anticuerpos secundarios fluorescentes, amplificando la señal emitida.

Fluoroenzimoinmunoensayo (FEIA)

Variante de inmunoensayo enzimático donde la enzima unida al complejo inmunológico cataliza la conversión de un sustrato específico en un compuesto fluorescente cuantificable.

MEIA

Inmunoensayo enzimático sobre micropartículas en el cual la fase sólida está constituida por partículas microscópicas que aumentan la superficie de unión, optimizando la cinética y automatización del ensayo.

Fotoblanqueo (Photobleaching)

Pérdida irreversible de la intensidad de emisión fluorescente que sufren los fluorocromos debido a alteraciones químicas tras una exposición prolongada a la fuente luminosa de excitación.