Biologie Celulară - Tehnici de Microscopie și Culturi Celulare

Flashcarduri de vocabular cu noțiunile cheie, echipamentele și procedurile de bază din domeniul microscopiei și culturilor de celule.

Microscopie

Tehnică de vizualizare a obiectelor sau zonelor din obiecte care nu pot fi observate sau studiate cu ochiul liber, utilizând un microscop.

Putere de mărire

Caracteristică a unui sistem optic care măsoară de câte ori este mărită imaginea unui obiect analizat.

Rezoluție (microscopie)

Distanța minimă la care două puncte distincte ale unui specimen pot fi distinse separat de către un sistem optic.

Sistemul optic al microscopului

Ansamblul optic format din sursă de lumină, condensor, obiectiv și ocular, prin care trece fasciculul de lumină pentru a forma imaginea mărită a obiectului analizat.

Obiectiv 4x

Obiectiv optic cu funcție de lupă, folosit pentru localizarea inițială a secțiunii sau a celulelor pe lamă.

Obiectiv 10x

Obiectiv optic utilizat pentru orientarea generală pe preparatul microscopic.

Obiective de diagnostic histologic și citologic

Obiective microscopice cu mărire superioară ($20\times$, $40\times$, $60\times$ și $100\times$) utilizate pentru stabilirea diagnosticului structural tisular sau celular detaliat.

Formula rezoluției microscopului optic

Relația $\text{Rezoluție} = \frac{0{,}61 \times \text{Lungimea de undă}}{\text{Indicele de refracție} \times \text{sinus de semi-unghiul de deschidere}}$, exprimând limita teoretică de separare a două puncte.

Puterea de mărire totală (microscop optic)

Valoarea obținută prin înmulțirea puterii de mărire a ocularului cu puterea de mărire a obiectivului utilizat.

Microscopie electronică

Tehnică de vizualizare cu rezoluție foarte mare ce utilizează un fascicul de electroni în locul luminii vizibile pentru a investiga structura celulelor, a organitelor și a complexelor macromoleculare.

Microscop electronic de transmisie (TEM)

Microscop electronic care detectează electronii ce traversează proba, furnizând detalii structurale interne la o rezoluție foarte înaltă de aproximativ $0{,}2\,\text{nm}$.

Microscop electronic de scanare (SEM)

Microscop electronic care captează electronii reflectați de suprafața probei, oferind imagini de relief tridimensional cu o rezoluție de aproximativ $50\,\text{nm}$.

Microscopie de fluorescență

Tehnică de vizualizare bazată pe marcarea componentelor celulare specifice cu o sondă fluorescentă (fluorofor), care devine vizibilă prin emisie luminoasă după excitarea cu o lungime de undă specifică.

Imunocitochimie

Metodă de studiu proteomic ce utilizează anticorpi specifici pentru a identifica și localiza precis proteinele de interes în interiorul celulelor sau țesuturilor.

Western blotting

Metodă moleculară utilizată pentru separarea, detectarea și evaluarea expresiei sau modificărilor post-translaționale ale proteinelor dintr-o probă biologică.

Citometrie în flux

Tehnică folosită pentru separarea și caracterizarea celulelor individuale aflate în suspensie, bazată pe parametrii lor fizici și pe markerii moleculari de suprafață.

PCR (Polymerase Chain Reaction)

Tehnică de biologie moleculară folosită pentru amplificarea selectivă sau neselectivă a unor secvențe specifice de ADN.

Studiu celular in situ

Metodă de studiu în care populația celulară este menținută în contextul organismului ei de origine, permițând analiza proceselor biologice prin modularea unor factori specifici.

Studiu celular in vitro

Abordare experimentală în care celulele sunt izolate din organism și menținute în medii de laborator controlate riguros (culturi celulare).

Explant de țesut

Tehnică de cultivare organotipică ce implică prelevarea unui fragment intact de țesut sau organ de la o plantă sau un animal, menținându-i mozaicismul celular și arhitectura tridimensională.

Cultură de celule primare

Cultură ex vivo constituită din celule proaspăt izolate dintr-un organism multicelular, caracterizată printr-un număr limitat de diviziuni înainte de a intra în senescență.

Linii celulare imortalizate

Populații celulare modificate (prin tumorigeneză, transducție virală sau alterarea căilor reglatoare) care au dobândit capacitatea de a se divide pe termen nelimitat în condiții de laborator.

Organoizi

Microțesuturi 3D crescute în laborator din celule stem, care se autoorganizează și reproduc caracteristicile funcționale și arhitecturale ale unui organ.

Microscop inversat

Instrument optic în care sursa de lumină este situată deasupra platoului, iar obiectivele dedesubt, conceput pentru monitorizarea celulelor direct în vasele de cultură (flask-uri sau plăci).

Condiții standard de incubare (celule mamaliene)

Parametrii de mediu esențiali pentru supraviețuirea și proliferarea celulelor mamaliene: temperatură de $37\,^\circ\text{C}$, concentrație de $5\%$ $\text{CO}_2$ și pH fiziologic neutru ($7{,}0 - 7{,}4$).

Hotă de biosecuritate de Clasa II

Echipament de protecție prevăzut cu flux laminar și filtre HEPA care recirculă $70\%$ din aerul filtrat și evacuează $30\%$, oferind protecție concomitentă pentru operator, probă și mediul exterior.

Filtru HEPA (High Efficiency Particulate Air)

Filtru cu porozitate de $0{,}22\,\mu\text{m}$ utilizat în hotele cu flux laminar pentru îndepărtarea particulelor și asigurarea unui spațiu de lucru microbiologic steril.

Nivel de biosecuritate 2 (BSL-2)

Standard de biosecuritate obligatoriu pentru laboratoarele care manipulează agenți cu risc biologic moderat, responsabili de boli transmisibile prin ingestie, inhalare sau injectare; este cerința minimă pentru majoritatea culturilor celulare.

Nivel de biosecuritate 4 (BSL-4)

Cel mai riguros nivel de izolare de laborator, rezervat patogenilor letali transmisibili prin aerosoli, pentru care nu există vaccinuri sau tratamente medicale disponibile.

Tripsinizare

Etapă enzimatică din protocolul de subcultivare a celulelor aderente în care se aplică o soluție de tripsină/EDTA pentru a desprinde monostratul celular de pe suportul vasului de cultură.