Laboratorio di Diagnostica Clinica e Controllo di Qualità

Flashcard di vocabolario basate sulle dispense di Laboratorio di Diagnostica Clinica e Controllo di Qualità, contenenti concetti, equazioni, metodologie analitiche ed enzimi.

Siero

La componente liquida del sangue ottenuta lasciandolo coagulare e poi centrifugandolo, priva di fibrinogeno e dei fattori della coagulazione.

Plasma

La parte liquida del sangue (pari a circa il $55\%$ del volume totale) ottenuta bloccando la cascata di coagulazione mediante l'impiego di anticoagulanti.

Accuratezza e Precisione

La precisione indica la concordanza tra i risultati di una serie di misure distinte (repliche) sullo stesso campione. L'accuratezza indica il grado di concordanza tra il valore medio sperimentale trovato e il valore vero.

Inaccuratezza

La differenza quantitativa tra il valore medio sperimentale ottenuto dalle analisi replicate e il valore vero della sostanza dosata.

Coefficiente di variazione ($CV$)

Parametro calcolato con la formula $CV = \frac{DS}{x} \times 100$ (dove $DS$ è la deviazione standard e $x$ è la media), impiegato per normalizzare l'imprecisione dell'esecuzione analitica e confrontare campioni a concentrazioni differenti.

Legge di Lambert-Beer

Legge fisica espressa dalla formula $A = a \times b \times c$, dove $A$ è l'assorbanza, $a$ il coefficiente di estinzione della molecola, $b$ il cammino ottico (in $\text{cm}$) e $c$ la concentrazione del campione.

Spettrofotometro

Strumento analitico composto da una sorgente luminosa (lampada a tungsteno per il visibile a $350\text{--}700\,\text{nm}$, lampada al deuterio per l'UV a $200\text{--}350\,\text{nm}$), un monocromatore, cuvette di contenimento e un lettore di assorbanza.

RIA (Radio Immuno Assay)

Immunodosaggio competitivo in cui una quantità fissa di antigene marcato radioattivamente e una quantità incognita di antigene "freddo" competono per i siti di legame limitati di un anticorpo presente in quantità fissa.

Sandwich-ELISA (s-ELISA)

Dosaggio immunometrico in cui l'antigene viene catturato da un anticorpo primario ancorato al pozzetto e successivamente rivelato da un anticorpo secondario coniugato all'enzima perossidasi di rafano (HRP).

Unità di attività enzimatica ($1\,\text{U}$)

La quantità di enzima che catalizza la conversione di $1\,\mu\text{mol}$ di substrato al minuto in condizioni standard determinate di temperatura, pH e saturazione di substrato.

Isoenzimi

Forme molecolari distinte di un enzima che catalizzano la medesima reazione chimica ma sono prodotte da tessuti differenti e differiscono per proprietà fisico-chimiche quali carica, punto isoelettrico ($pI$) e massa molecolare.

SDS-PAGE

Tecnica elettroforetica su gel di poliacrilammide in presenza di SDS (detergente che denatura le proteine e conferisce carica negativa uniforme) e di un agente riducente come il $\beta\text{-mercaptoetanolo}$ o DTT per scindere i ponti disolfuro.

Isoelettrofocalizzazione (IEF)

Tecnica elettroforetica ad alta risoluzione che separa le molecole proteiche lungo un gradiente stabile di pH generato da anfoliti, bloccandone la migrazione nel punto in cui il pH della soluzione corrisponde al loro punto isoelettrico ($pI$).

MALDI-TOF

Tecnica di spettrometria di massa in cui i peptidi triptici, co-cristallizzati con una matrice organica su supporto di acciaio, vengono vaporizzati e ionizzati da un laser a $337\,\text{nm}$ e accelerati nel tubo di volo per misurarne il rapporto massa/carica ($m/z$).

Enzimi di restrizione di tipo II

Endonucleasi batteriche omodimeriche usate nel DNA ricombinante che riconoscono sequenze palindromiche di $4\text{--}8$ basi azotate e idrolizzano il legame fosfodiesterico all'interno del sito senza richiedere ATP.

Isoschizomeri e Isocaudameri

Gli isoschizomeri sono enzimi di restrizione estratti da organismi diversi che riconoscono la stessa sequenza bersaglio; gli isocaudameri riconoscono sequenze differenti ma generano estremità coesive compatibili.

PCR (Polymerase Chain Reaction)

Tecnica di amplificazione genica in vitro basata sulla successione di cicli di denaturazione ($95\,^{\circ}\text{C}$), annealing ($54\text{--}60\,^{\circ}\text{C}$) ed estensione ($72\,^{\circ}\text{C}$) da parte della Taq polimerasi, descritta dall'equazione $N = N_0(1+E)^n$.

RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR)

Variante della PCR che utilizza l'enzima trascrittasi inversa per retro-trascrivere l'RNA messaggero in DNA complementare (cDNA) tramite un primer oligo(dT) legato alla coda di poli(A), utile per analizzare l'espressione genica.

Ciclo soglia ($C_T$)

Il numero di ciclo in Real-Time PCR nel quale il segnale di fluorescenza emesso dal campione supera la linea soglia (threshold); la sua ampiezza è inversamente proporzionale alla quantità iniziale di DNA stampo.

Sonda TaqMan

Sonda oligonucleotide specifica per il gene target marcata con un reporter in 5' e un quencher in 3'; la sua idrolisi ad opera dell'attività esonucleasica $5'\rightarrow3'$ della Taq polimerasi libera il reporter emettendo fluorescenza.

Molecular Beacons

Sonde fluorogeniche con struttura a stelo-ansa provviste di fluoroforo al 5' e quencher al 3'; durante l'annealing si legano alla sequenza bersaglio aprendo lo stelo ed emettendo fluorescenza senza venire degradate.

Contaminazione da Carry-over

Inquinamento della miscela di PCR provocato da ampliconi derivanti da reazioni precedenti; si previene sostituendo la dTTP con dUTP durante l'amplificazione e trattando i campioni con l'enzima uracile N-glicosilasi (UNG).

Dosaggio del glucosio con metodo Glucosio Ossidasi

Saggio enzimatico colorimetrico indiretto in cui la glucosio ossidasi converte il glucosio in acido gluconico e $H_2O_2$; la perossidasi usa l'$H_2O_2$ per ossidare l'o-dianisidina (gialla), il cui colore vira al rosa ($540\,\text{nm}$) dopo l'aggiunta di $H_2SO_4$.