Agares y pruebas bioquimicas de enterobacterias

Medios selectivos/diferenciales para enterobacterales

Definiciones

Medios enriquecidos:
Contienen componentes adicionales (además de los básicos) para permitir el desarrollo de microorganismos exigentes, que no crecerían en un medio general.

Medios selectivos:
Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no deseados. Esto facilita el crecimiento del microorganismo deseado.

Medios diferenciales:
Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la especie o grupo de microorganismos.

Fermentación

Proceso metabólico de óxido-reducción que ocurre en ambiente anaerobio, donde un sustrato orgánico es el aceptor final de hidrógeno (electrones) en lugar del oxígeno.

Características comunes de los enterobacterales

  • Bacilos Gram negativos

  • Sin agrupación

  • No esporulados

  • Cortos

  • No capsulados (excepto Klebsiella y Enterobacter)

  • Móviles (excepto Shigella y Klebsiella)

  • No exigentes

  • Todos fermentan glucosa

Géneros según características:

Lactosa positivos:

  • Escherichia

  • Klebsiella

  • Enterobacter

  • Citrobacter

Lactosa negativos:

  • Salmonella

  • Shigella

  • Serratia

  • Proteus

  • Yersinia

  • Morganella

  • Providencia

  • Pseudomonas

Capsulados:

  • Klebsiella

  • Enterobacter

Productores de H₂S:

  • Citrobacter

  • Salmonella

  • Proteus

Productores de swarming:

  • Serratia

  • Proteus

  • Pseudomonas

Sin flagelos:

  • Shigella

  • Klebsiella

Todos son de metabolismo facultativo, excepto Pseudomonas (aerobio estricto).

Agar sangre

  • Colonias blancas o grisáceas, aspecto húmedo, convexas, bordes regulares.

  • Pseudomonas: únicas hemolíticas.

  • Todos causan septicemia e infecciones urinarias excepto Shigella.

Agar Endo

  • Función:

    • Medio selectivo y diferencial para enterobacterias.

    • Aísla bacterias Gram negativas y diferencia por fermentación de lactosa.

    Composición:

    • Peptona

    • Lactosa

    • Sulfito de sodio

    • Fucsina básica (colorante e indicador de fermentación)

    • Agar

    Resultados:

    • Colonias rosadas con brillo metálico: Fermentación de lactosa positiva (ej. E. coli).

    • Colonias incoloras o del color del medio: No fermentan lactosa (ej. Salmonella, Shigella).

Agar EMB (Eosina Azul de Metileno)

Características:

  • Aisla Gram negativos, enterobacterias.

  • Medio púrpura/vinoso.

  • No inhibe swarming.

  • No detecta H2S.

Composición:

  • Peptona

  • Lactosa

  • Sacarosa

  • Fosfato dipotásico

  • Azul de metileno

  • Eosina

  • Agar

Componentes diferenciales:

  • Lactosa/sacarosa

Componentes selectivos:

  • Eosina (Indicador)

  • Azul de metileno (Inhibidor)

Resultados:

  • Verde metálico/Azul oscuro: fermentación fuerte (Ej. E. coli)

  • Rosado/morado: fermentación débil (Ej. Enterobacter, Klebsiella)

  • Incoloras: no fermentan lactosa (Ej. Salmonella, Shigella)

TSI (Triple Sugar Iron)

Caracteristicas:

  • Aisla Gram negativas.

  • Diferenciacion de enterobacterias.

  • Medio de cultivo preparado: Rojo.

Componentes:

  • Glucosa, lactosa, sacarosa

  • Indicador rojo fenol

  • Tiosulfato de sodio (Produccion H2S)

Resultados:

  • Fondo negro: producción de H₂S

  • Gas: desplazamiento del agar

Citrato de Simmons

Función:
Determina si el MO usa citrato como única fuente de carbono. Si es así, se alcaliniza el medio.

Si utiliza el citrato se hidroliza,

(NH4)2HPO4 → 2NH4OH + H3PO4=Alcaliniza el medio

Indicador:

  • Azul de bromotimol (verde a azul con alcalinidad)

Resultados:

  • Positivo: crecimiento y cambio a azul

  • Negativo: sin crecimiento, medio verde

Producción de Indol (medio SIM)

Determina la capacidad de algunos MO de producir indol por la oxidación del triptófano mediante enzimas intracelulares llamadas triptofanasa.

Características

  • Medio semisólido

  • Verificar la movilidad

  • Producción de indol

  • Producción de sulfuro de hidrógeno

  • Se siembra por picadura

Resultados:

  • Negativo: sin color

  • Negativo: Anillo naranja (escatol)

  • Positivo: anillo rojo (producción de indol)

Medio MIO

Movilidad:

  • Positiva: turbidez

  • Negativa: línea de siembra visible

Ornitina decarboxilasa:

  • Positiva: púrpura

  • Negativa: amarillo

Indol:

  • Positivo: color rojo

  • Negativo: incoloro o amarillento

Medio Christensen (Urea)

Función:
Detecta actividad ureásica. Ureasa hidroliza urea → amoníaco → alcalinización (amarillo a rojo).

Características del medio

  • Diferenciar en base a la actividad ureásica

  • Identificar MO que hidrolizan la urea

Indicador:

  • Rojo de fenol.

Agar LIA (Lisina Hierro Agar)

Función:
Detecta descarboxilación y desaminación de lisina, y producción de H₂S.

Características del medio:

  • Diferenciar Salmonella spp.

  • Color púrpura rojizo

Indicador:

  • Púrpura de bromocresol

Resultados:

  • Descarboxilación positiva: púrpura en todo el tubo

  • Negativa: púrpura arriba, amarillo abajo

  • Desaminación: rojiza arriba

  • H₂S: ennegrecimiento

Pruebas RM-VP

Rojo de Metilo (RM):

  • Comprobar la capacidad de un MO de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad de amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido, manteniendo un pH menor de 4.4.

Voges-Proskauer (VP):

  • Determina la capacidad de algunos MO de producir acetoína (producto final neutro) a partir de la fermentación de la glucosa.

Reactivos:

  • RM: rojo de metilo al 0.04%

  • VP: α-naftol y KOH

Resultados:

  • Deben ser contrarios (si ambos positivos o negativos: error)

Galería API 20E

Sistema miniaturizado para identificar enterobacterias y Gram negativos.

Instrucciones:

  1. Si glucosa es negativa y ≤2 pruebas positivas, no añadir reactivos. Usar otras galerías (API 20NE, OF, etc.)

  2. Si glucosa es positiva o ≥3 positivas, añadir reactivos.

Interpretación:

  • Se obtiene un código de 7 cifras

  • Cada triplete suma según posición (0,1,2,4)

  • Se usan sistemas automatizados para interpretación