Agares y pruebas bioquimicas de enterobacterias

Medios selectivos/diferenciales para enterobacterales

Definiciones

Medios enriquecidos:
Contienen componentes adicionales (además de los básicos) para permitir el desarrollo de microorganismos exigentes, que no crecerían en un medio general.

Medios selectivos:
Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no deseados. Esto facilita el crecimiento del microorganismo deseado.

Medios diferenciales:
Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la especie o grupo de microorganismos.

Fermentación

Proceso metabólico de óxido-reducción que ocurre en ambiente anaerobio, donde un sustrato orgánico es el aceptor final de hidrógeno (electrones) en lugar del oxígeno.

Características comunes de los enterobacterales

• Bacilos Gram negativos

• Sin agrupación

• No esporulados

• Cortos

• No capsulados (excepto Klebsiella y Enterobacter)

• Móviles (excepto Shigella y Klebsiella)

• No exigentes

• Todos fermentan glucosa

Géneros según características:

Lactosa positivos:

• Escherichia

• Klebsiella

• Enterobacter

• Citrobacter

Lactosa negativos:

• Salmonella

• Shigella

• Serratia

• Proteus

• Yersinia

• Morganella

• Providencia

• Pseudomonas

Capsulados:

• Klebsiella

• Enterobacter

Productores de H₂S:

• Citrobacter

• Salmonella

• Proteus

Productores de swarming:

• Serratia

• Proteus

• Pseudomonas

Sin flagelos:

• Shigella

• Klebsiella

Agar sangre

• Colonias blancas o grisáceas, aspecto húmedo, convexas, bordes regulares.

• Pseudomonas: únicas hemolíticas.

• Todos causan septicemia e infecciones urinarias excepto Shigella.

Agar Endo

• Función:

  • Medio selectivo y diferencial para enterobacterias.

  • Aísla bacterias Gram negativas y diferencia por fermentación de lactosa.

  Composición:

  • Peptona

  • Lactosa

  • Sulfito de sodio

  • Fucsina básica (colorante e indicador de fermentación)

  • Agar

  Resultados:

  • Colonias rosadas con brillo metálico: Fermentación de lactosa positiva (ej. E. coli).

  • Colonias incoloras o del color del medio: No fermentan lactosa (ej. Salmonella, Shigella).

Agar EMB (Eosina Azul de Metileno)

Características:

• Aisla Gram negativos, enterobacterias.

• Medio púrpura/vinoso.

• No inhibe swarming.

• No detecta H2S.

Composición:

• Peptona

• Lactosa

• Sacarosa

• Fosfato dipotásico

• Azul de metileno

• Eosina

• Agar

Componentes diferenciales:

• Lactosa/sacarosa

Componentes selectivos:

• Eosina (Indicador)

• Azul de metileno (Inhibidor)

Resultados:

• Verde metálico/Azul oscuro: fermentación fuerte (Ej. E. coli)

• Rosado/morado: fermentación débil (Ej. Enterobacter, Klebsiella)

• Incoloras: no fermentan lactosa (Ej. Salmonella, Shigella)

TSI (Triple Sugar Iron)

Caracteristicas:

• Aisla Gram negativas.

• Diferenciacion de enterobacterias.

• Medio de cultivo preparado: Rojo.

Componentes:

• Glucosa, lactosa, sacarosa

• Indicador rojo fenol

• Tiosulfato de sodio (Produccion H2S)

Resultados:

• Fondo negro: producción de H₂S

• Gas: desplazamiento del agar

• 

Citrato de Simmons

Función:
Determina si el MO usa citrato como única fuente de carbono. Si es así, se alcaliniza el medio.

Si utiliza el citrato se hidroliza,

(NH4)2HPO4 → 2NH4OH + H3PO4=Alcaliniza el medio

Indicador:

• Azul de bromotimol (verde a azul con alcalinidad)

Resultados:

• Positivo: crecimiento y cambio a azul

• Negativo: sin crecimiento, medio verde

  

Producción de Indol (medio SIM)

Determina la capacidad de algunos MO de producir indol por la oxidación del triptófano mediante enzimas intracelulares llamadas triptofanasa.

Características

• Medio semisólido

• Verificar la movilidad

• Producción de indol

• Producción de sulfuro de hidrógeno

• Se siembra por picadura

Resultados:

• Negativo: sin color

• Negativo: Anillo naranja (escatol)

• Positivo: anillo rojo (producción de indol)

  

Medio MIO

Movilidad:

• Positiva: turbidez

• Negativa: línea de siembra visible

Ornitina decarboxilasa:

• Positiva: púrpura

• Negativa: amarillo

Indol:

• Positivo: color rojo

• Negativo: incoloro o amarillento

  

Medio Christensen (Urea)

Función:
Detecta actividad ureásica. Ureasa hidroliza urea → amoníaco → alcalinización (amarillo a rojo).

Características del medio

• Diferenciar en base a la actividad ureásica

• Identificar MO que hidrolizan la urea

Indicador:

• Rojo de fenol.

  

Agar LIA (Lisina Hierro Agar)

Función:
Detecta descarboxilación y desaminación de lisina, y producción de H₂S.

Características del medio:

• Diferenciar Salmonella spp.

• Color púrpura rojizo

Indicador:

• Púrpura de bromocresol

Resultados:

• Descarboxilación positiva: púrpura en todo el tubo

• Negativa: púrpura arriba, amarillo abajo

• Desaminación: rojiza arriba

• H₂S: ennegrecimiento

  

Pruebas RM-VP

Rojo de Metilo (RM):

• Comprobar la capacidad de un MO de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad de amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido, manteniendo un pH menor de 4.4.

Voges-Proskauer (VP):

• Determina la capacidad de algunos MO de producir acetoína (producto final neutro) a partir de la fermentación de la glucosa.

Reactivos:

• RM: rojo de metilo al 0.04%

• VP: α-naftol y KOH

Resultados:

• Deben ser contrarios (si ambos positivos o negativos: error)

  

Galería API 20E

Sistema miniaturizado para identificar enterobacterias y Gram negativos.

Instrucciones:

1. Si glucosa es negativa y ≤2 pruebas positivas, no añadir reactivos. Usar otras galerías (API 20NE, OF, etc.)

2. Si glucosa es positiva o ≥3 positivas, añadir reactivos.

Interpretación:

• Se obtiene un código de 7 cifras

• Cada triplete suma según posición (0,1,2,4)

• Se usan sistemas automatizados para interpretación