Prácticas bioquímica

Diluciones

Dilución: consiste en preparar una solución menos concentrada a partir de una más concentrada.

El factor de dilución lo cuantifica

Fd = Ci/Cf = Vf/Vi

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN

Para determinar la presencia o concentración de compuestos que forman parte de una mezcla.

Absorbancia: capacidad de absorber luz de una disolución. varía según el valor de landa.

PRÁCTICA 1: ESPECTROS DE ABSORCIÓN EN EL VISIBLE

Objetivos:

  1. Aprender el uso del espectrofotómetro.

  2. Determinación del máximo de absorción de los cromóforos.

Procedimiento:

se miden las cubetas antes estableciendo un blanco cada vez que cambiemos de compuesto.

  1. Cubeta 1: 1 ml de agua (tubo blanco)

  2. Cubeta 2: 1 ml de azul de bromofenol

  3. Cubeta 3: 1 ml de naranja de metilo Cubeta 4: 0.5 ml de de azul de bromofenol + 0.5 ml de naranja de metilo

  4. Cubeta 5: 1 ml de una dilución 1/2.5 de la solución inicial de naranja de metilo o azul de bromofenol.

Conclusión:

  • La absorbancia depende de la concentración de soluto. (directamente proporcionales).

PRÁCTICA 2: COMPROBACIÓN DE LA LEY DE BEER-LAMBERT (LEY DE BEER)

Fórmulas:

  • Absorbancia: A= log Io/I (no tiene uds) (Io siempre será mayor que I)

  • Ley de Beer-Lambert:

  • Transmitancia:

  • Curva patrón: y=a*x (y = absorbancia; x = concentración; a (pendiente) = coeficiente de extinción)


Objetivos:

  1. Comprobación de la ley de Beer-Lambert

  2. Preparación de curvas patrón

  3. Determinación experimental de la concentración de soluto en una muestra problema.

Cálculo:

PRÁCTICA 3. SEPARACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS MEDIANTEELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA.

Electroforesis de ácidos nucleicos: para separar, identificar y purificar moléculas o fragmentos de DNA y RNA. Los ácidos nucleicos están cargados negativamente y migran hacia el ánodo.

Se usan geles de agarosa de distinta concentración según el tamaño de los fragmentos (baja concentración para fragmentos de gran tamaño)

Material:

- Cubetas de electroforesis, moldes y peines, cinta adhesiva.

- Fuentes de alimentación.

- microondas.

- Matraces Erlenmeyer, probetas de 100 mL, vasos de 0,5-1 L, frascos Pyrex® con tapón de rosca.

- Microcentrífuga.

- Agitadores tipo vórtex.

- Balanza, espátulas.

- Pipetas automáticas (para distintos rangos de volumen), puntas de carga.

- Eppendorfs, gradillas.

- Transiluminador de UV, pantalla protectora.

- Guantes.
- Contenedores para desechos líquidos y puntas usadas

Reactivos:

  • Agarosa

  • TAE (tampón)(hacemos una dilución para ajustar la concentración)

  • TE (tampón pH HCl)

  • Tampón de carga (azul bromofenol→ver por donde va el ADN por el TAE; sacarosa→ espesante)

  • GelRed

  • Patrones de tamaño molecular: marcadores de peso molecular, bandas con un tamaño ya determinado.

Método:

  1. Preparación de los moldes:

  2. Preparación del gel: preparas primero el TAE, luego pesas la agarosa y la echas en el TAE. Lo viertes y lo dejas gelificar.

  3. Preparación de la cubeta de electroforesis: Tampón TAE en cubeta y metemos también gel.

  4. Preparación de las muestras

  5. Carga de las muestras

  6. Desarrollo de la electroforesis

  7. Revelado: en UV

PRÁCTICA 4: EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS Y SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA