COURS MICROBIOLOGIE - D) Identification de l'espèce

COURS MICROBIOLOGIE

D) Identification de l'espèce

Chapitre 11 TS1 ABM

  • Introduction à S. aureus

    • S. aureus est considéré comme le plus pathogène pour l'homme.

    • Doit être distingué des Staphylococci à coagulase négative (SCN), surtout ceux impliqués en pathologie humaine.

1) Tests Utilisés pour Identifier S. aureus
a) Recherche de la coagulase libre

  • Méthode de mélange:

    • 0,5 mL de plasma de lapin + 0,5 mL de suspension dense ou culture en milieu pour staphylocoagulase (BCC).

  • Incubation:

    • 1 à 24h à 37°C avec suivi régulier de la formation du culot. Cela peut être redissout par la sécrétion de fibrinolysine.

    • Références : Cf. AT20-21.

b) Recherche du récepteur au fibrinogène (coagulase liée = clumping factor)

  • Test d'agglutination avec hématies porteuses de fibrinogène humain.

c) Recherche de la protéine A

  • Test d'agglutination avec :

    • Hématies de mouton sensibilisées avec un sérum anti-hématie de mouton.

    • Particules de latex porteuses d'IgG.

  • La protéine A en surface de S. aureus (liée au peptidoglycane) reconnait le fragment constant des immunoglobulines.

d) Utilisation de tests d'agglutinations commerciaux

  • Recherche simultanée :

    • Récepteur au fibrinogène

    • Protéine A

    • Polysaccharide capsulaire de S. aureus sur billes de latex portant du fibrinogène ou des immunoglobulines.

    • Attention: le polysaccharide capsulaire peut masquer les autres récepteurs et être à l'origine de faux-négatifs.

    • Références : Cf. AT20-21.

2) Autres Tests d'identification
e) Recherche de la thermonuclease

  • Procédure:

    • Culture de la souche dans bouillon Coeur-Cervelle.

    • Bouillon chauffé 15 min à 100°C (dénature les DNases des autres espèces).

    • Puis, dépôt dans une gélose contenant ADN et bleu de toluidine.

    • Apparition d'une zone rose indique la présence d'une DNase thermostable, caractéristique de S. aureus.

f) Utilisation de galeries d'identification

  • Utilisées pour souche non identifiée comme S. aureus par des tests plus rapides, tests miniaturisés basés sur l'utilisation de sucres.

Introduction des Coques Gram Positifs

Les coques Gram positifs

  • Genre bactérien majeur dans la flore commensale de la peau et muqueuses.

  • Distinction essentielle en bactériologie médicale entre présence pathologique et contamination.

Classification des Coques Gram Positifs
1) Coques Gram + catalase +

  • Groupes:

    • Staphylococcus (Staphylococcaceae) - souvent en amas ou chainettes courtes.

    • Micrococcus (Micrococcaceae) - souvent en diplocoques ou longues chainettes.

2) Coques Gram + catalase -

  • Groupes:

    • Streptococcus (Streptococcaceae)

    • Enterococcus (Enterococcaceae)

Isolation sur milieux gélosés

  • Colonies: Opaques, circulaires, variaient du jaune-orangé au blanc.

  • Gélose au sang: S. aureus généralement β\beta-hémolytique.

a) Milieu Chapman

  • Contient 7,5% NaCl et mannitol, permet de détecter les S. aureus et S. saprophyticus.

  • Attention, d'autres germes peuvent fermenter le mannitol.

b) Milieu Baird-Parker

  • Contient tellurite de potassium et jaunet d'œuf.

  • Permet la culture de S. aureus sous forme de colonies noires.

c) Milieux chromogènes

  • Identification directe des S. aureus basée sur culture et couleur des colonies (ex : CHROM ID S aureus).

Activités Pratiques

Activité 1: Milieu Chromogène

  • Principe: Milieu contenant molécule incolore qui se transforme en couleur sous action enzymatique.

  • Éléments de composition de CHROMID S. aureus.

  • Enzyme glucosidase présente chez S. aureus, absente chez autres staphylocoques.

Activité 2: Analyse des Résultats de Prélevements.

  • Résultats d'un écouvillonnage nasal, avec colonies vertes sur SAID et absence sur MRSA, indiquent une non présence de SARM.

Pouvoir Pathogène de S. aureus

A) Formation de Biofilms

  • Capacité des staphylocoques à former des biofilms sur surfaces inertes.

  • Protections contre agents antimicrobiens et système immunitaire.

B) Facteurs de Virulence

  1. Adhésion

    • Protéines de surface pour adhésion aux tissus, récepteurs comme collagène, fibronectine, élastine.

  2. Évasion Immunitaire

    • Protéine A neutralise anticorps; coagulase libre et fibrinolysine protègent des phagocytes et favorisent dissémination.

  3. Nécrose des tissus

    • Enzymes telles que hyaluronidase, DNase, protéases participent aux dommages tissulaires.

    • Toxines hémolytiques altérant membranes cellulaires.

  4. Autres Toxines: TSST (Toxine du choc toxique staphylococcique), entérotoxine thermostable.

IV) Sensibilité aux Antibiotiques

  • Choix de l'antibiothérapie selon antibiogramme.

A) Sensibilité aux β\beta-lactamines

  • Pénicilline active sur souches sans ß-lactamases, mais rare.

  • Méticilline/oxacilline efficaces contre les souches sensibles.

  • Résistance via gène mecA ou mecC.

B) Glycopeptides

  • Vancomycine et teicoplanine utilisées pour infections graves.

  • Résistances émergentes aux glycopeptides (souches GISA et VRSA).

C) Autres Familles d'ATB

  • Souches méti-R résistantes aux aminosides et fluoroquinolones.

Conclusion

  • Les Staphylocoques sont des agents pathogènes fréquents, S. aureus en particulier est impliqué dans des infections graves, nécessitant une surveillance et une identification rigoureuse en milieu clinique.