Determinación de Lactato Deshidrogenasa (LDH) en Suero y Aplicaciones Clínicas

Definición: El Lactato deshidrogenasa o LDH es una enzima que se encuentra presente en todos los tejidos del cuerpo humano.
Función Biológica: Cumple un papel fundamental en el proceso de la respiración celular.
Distribución: Es una enzima abundante dentro de las células de los tejidos; en condiciones normales, presenta niveles bajos en el flujo sanguíneo.
Relación Metabólica: La LDH interviene en la vía de la glucosa y el glucógeno, participando en la fermentación láctica (conversión de glucosa a lactato) en el músculo y en la gluconeogénesis (conversión de lactato a glucosa o glucógeno) en el hígado.

Indicador de Daño Tisular: Al ser una enzima predominantemente intracelular, su elevación en el suero es un índice directo de daño en los tejidos, lo que provoca su liberación a la circulación sanguínea.
Rango de Lesión: El aumento de la actividad enzimática puede ser causado por diversos grados de daño:
- Daño leve: Simple anoxia con ligero daño celular y pérdida de citoplasma.
- Daño severo: Necrosis celular extensa.
Propósito de la Prueba:
- Averiguar si el paciente ha sufrido daño en algún tejido corporal.
- Monitorear problemas médicos que causan daño tisular (anemia, enfermedades hepáticas, pulmonares o infecciones).
- Vigilar la eficacia de la quimioterapia en ciertos tipos de cáncer.

Infarto Agudo de Miocardio (IAM):
- La actividad de LDH total es un elemento diagnóstico clave junto con la Creatina Quinasa (CK) y la Aspartato Aminotransferasa (AST).
- Cronología de la elevación: Comienza a aumentar entre $12 \text{ y } 24 \text{ horas}$ después del infarto.
- Pico máximo: Alcanza su nivel más alto entre las $48 \text{ y } 72 \text{ horas}$ .
- Persistencia: Permanece elevada en el organismo hasta el séptimo o décimo día.
Patologías Hepáticas y Renales:
- Aumento en casos de necrosis hepática por agentes tóxicos o infecciones agudas como la hepatitis viral.
- Incremento en necrosis tubular renal y pielonefritis.
Otras Condiciones Médicas:
- Anemia.
- Trauma muscular y fracturas óseas.
- VIH/SIDA.
Líquido Cefalorraquídeo (LCR):
- El valor normal en el LCR es aproximadamente el $10\%$ de su valor en el suero.
- En las meningitis bacterianas, su valor aumenta marcadamente.
- En las meningitis virales, el valor de LDH solo aumenta en el $10\%$ de los casos.

Subunidades conocidas: Existen tres subunidades principales que presentan ligeras diferencias en su secuencia de aminoácidos:
- H (LDH B).
- M (LDH A).
- X (LDH C).
Isoenzimas: Las subunidades H y M se asocian para formar tetrámeros, dando lugar a 5 isoenzimas específicas según el tejido:
- LDH-1 ( $H_4$ ): Localizada en músculo cardíaco y eritrocitos.
- LDH-2 ( $H_3M$ ): Localizada en músculo cardíaco y células sanguíneas.
- LDH-3 ( $H_2M_2$ ): Localizada en los pulmones.
- LDH-4 ( $HM_3$ ): Localizada en riñones, placenta y páncreas.
- LDH-5 ( $M_4$ ): Localizada en hígado y músculo esquelético.
Electroforesis: Esta técnica permite ver la proporción relativa de las 5 isoenzimas, sirviendo como prueba orientativa para localizar el origen del daño.

Tumores Sanguíneos: Se observan valores elevados en leucemias y linfomas.
Leucemia Linfoblástica Aguda: Puede generar incrementos muy notables. Su medición es útil para el pronóstico y puede indicar una enfermedad ampliamente diseminada.
Metabolismo Tumoral: El tejido tumoral suele cambiar su síntesis de LDH hacia formas más anaerobias en comparación con el tejido sano.
Monitoreo: Niveles anormalmente altos durante el tratamiento pueden indicar que la terapia contra el cáncer no está obteniendo los resultados esperados.

Principio de la Reacción: El método mide la velocidad de formación de NADH.
Proporcionalidad: La velocidad de formación de NADH es directamente proporcional a la actividad catalítica de la LDH.
Medición Fotométrica: Se determina midiendo el aumento de la absorbancia a una longitud de onda de $340\,nm$ .
Estandarización: Las concentraciones están optimizadas para la medición a $37^\circ C$ , siguiendo los procedimientos de la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC).

Reactivos Provistos:
- Reactivo A: Solución de metilglucamina (MEG) $400\,mM$ y lactato $61\,mM$ ; pH de $9.4$ a $37^\circ C$ .
- Reactivo B: Solución que contiene NAD $61\,mM$ .
Reactivos no Provistos:
- Calibrador A plus de Wiener lab.
- Solución fisiológica ( $NaCl \, 9\,g/l$ ).
Equipamiento Necesario:
- Micropipeta para volúmenes precisos.
- Baño de maría (Memmert) a $37^\circ C$ .
- Espectrofotómetro o analizador automático.
- Pipetas, tubos de ensayo y gradillas.
- Agua destilada (libre de pirógenos).

Tipos de Muestra: Suero, plasma o Líquido Cefalorraquídeo (LCR).
Calidad de la Muestra:
- Debe obtenerse de manera habitual y estar estrictamente libre de hemólisis.
- El plasma debe estar libre de células y plaquetas, ya que estas poseen concentraciones elevadas de LDH.
- Se recomienda centrifugar y transferir el plasma a un tubo secundario.
Anticoagulantes:
- Heparina: Es el anticoagulante recomendado para el uso de plasma.
- EDTA o Citrato: Pueden utilizarse, pero el EDTA puede disminuir la actividad de la LDH hasta en un $10\%$ .

Preparar 2 tubos de ensayo en una gradilla.
En el primer tubo, colocar agua destilada e incubar en baño de maría durante $300\,segundos$ a $37^\circ C$ .
En el segundo tubo, mezclar la muestra de suero con el Reactivo B.
Incubar la mezcla en baño de maría durante $120\,segundos$ a $37^\circ C$ .
Realizar la lectura en el espectrofotómetro.
Realizar el cálculo automatizado para determinar la actividad de LDH.

Valores Estándar (U/l):
- Adultos: $135 - 240\,U/l$ .
- Niños (2 - 15 años): $120 - 300\,U/l$ .
- Recién nacidos (4 a 20 días): $240 - 600\,U/l$ .
Factores de Variabilidad: Se recomienda que cada laboratorio establezca rangos propios basados en sexo, edad, hábitos alimenticios y medicación de su población específica.
Preparación y Riesgos:
- No requiere preparación especial previa (ayuno, etc.).
- Riesgos mínimos asociados a la extracción de sangre (posible dolor leve o moretón).